T4 DNA连接酶（3U/μl)报价

特别提示：包括T4 DNA连接酶（3U/μl)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 DNA连接酶（3U/μl)
英文名称：T4 DNA Ligase（3U/μl)
产品货号：WH0227
产品规格：60U（Weiss)

本酶在以ATP作辅酶的情况下，可以催化相邻DNA链的5′磷酸基团和3′羟基之间的连接反应。平末端和粘性末端均可，此酶也可以催化双链RNA与双链DNA连接，但不能催化单链核酸的连接。

产品组成：

组分	规格
T4 DNA连接酶	60U
10×T4 DNA ligase Buffer	30μl

储存条件：T4 DNA连接酶和10×T4 DNA ligase Buffer必须放置于-20℃保存，避免反复冻融，10×T4 DNA ligase Buffer建议分装使用

活性单位定义：
1个Weiss活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、20分钟内将1nmol[32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20μl反应体系（50mM Tris-HCl,pH7.5),10 mM MgCl2,10mM DTT,1 mM ATP,25μg/ml BSA,0.12μM （300μg/ml)的5′DNA末端)中，在16℃、30分钟内50%连接HindIII酶切的Lambda DNA产物所需要的酶量。

使用示例：
1．先将10×T4 DNA ligase Buffer在冰上融化，并进行短暂的离心。
2.以10μl连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分：

成分	用量
目的DNA片段	约0.1pmol
载体DNA	约0.01pmol
10×T4 DNA ligase Buffer	1μl
T4 DNA Ligase	0.5-1μl
无菌去离子水	补足到10μl

3.16℃连接过夜。
4.将3～5μl连接产物转化至100μl感受态细胞中。

注意事项：
1.载体DNA和连接片段的摩尔比：对于不同的载体和DNA片段，要取得成功的连接，应分别建立具有不同摩尔数比例的连接反应。在大多数情况下，DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的3～10倍。
2.10×T4 DNA ligase Buffer中含ATP，为避免ATP的降解，建议解冻后的10×T4 DNA ligase Buffer分装成小包装并在-20℃保存。
3.平末端的载体与DNA片断连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。
注意：如果向连接反应体系中加入PEG可以促进钝末端的连接，但PEG可能导致cDNA片段克隆产物出现串联体并抑制包装反应。

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