9°N DNA连接酶 工具酶

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百奥莱博专业生产销*(代"售")9°N DNA连接酶 工具酶，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：9°N DNA连接酶 工具酶
产地：国产|进口
规格：2500U
英文名：9°N DNA Ligase
9°N DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶DNA链杂交的两条相邻寡核苷酸链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在45℃-90℃范围内均有活性。

产品用途：
1．可在高温条件下，连接DNA链上的切刻位点；
2．具有极高的耐热性，与PCR反应条件兼容；
3．可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测；
4．通过PCR扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变。

产品组成：

 

组份	规格
9°N DNA连接酶(40000U/mL)	62.5μL
10×Buffer	1.5mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指50μl反应体系中，45℃条件下，15分钟能使50%的1μg BstEII消化的λDNA片段(12bp 粘性末端)发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切口封闭单位。

注意事项：9°N DNA连接酶不能代替T4 DNA连接酶使用。该酶可以有效连接12bp的互补片段，但却无法连接4bp的互补片段(典型限制酶消化产物)。

欲咨询购买9°N DNA连接酶 工具酶，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒
编号：BTN70703
英文名称：Mycobacteria DNA column extraction kit
规格：50次
分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有25种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组DNA一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发。

试剂盒特点：
1. 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
2. PCR检测灵敏度一般在10-100CFU/mL样品。
3. 既可以使用培养的细菌，也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
化痰液	100ml
溶液A	7.5ml
溶液B	15ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
注意：文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关部门要求进行消毒处理。

一:培养的分枝杆菌样品的预处理
1. 刮取培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
2. 80℃放置20分钟以杀灭细菌。
3. 3000 g室温离心15分钟，弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
二:含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1. 将需要处理的痰液样品加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
2. 加入等体积的化痰液，充分混合均匀后室温放置15-30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间。
3. 3000 g室温离心15分钟，弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
三:含分枝杆菌的血液样品的预处理
1. 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理，具体操作见百奥莱博红细胞裂解液(BTN60403)使用手册。
2. 将得到的白细胞沉淀-20℃或更低温度放置10分钟。
3. 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
4.上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的TE或PBS缓冲液,直到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
5.离心5-10分钟沉淀细菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管，则可以12000～15000g室温离心。如果样品在10-15mL离心管，则3000-5000g室温离心。
6. 吸弃上清(含白细胞DNA)后所得细菌沉淀可以放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
四:细菌基因组DNA的提取
1. 将150μl 65℃预热过的溶液A加到有细菌沉淀的离心管中，充分震荡混匀。
2. 将细菌和溶液A的混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自备*仿，充分震荡混匀。
4. -20℃放置直到液体凝固，一般需要20-60分钟。过夜放置也可。
5. 放室温融化后振荡半分钟。
6. 12000～15000g室温离心3～5分钟，小心转移上清到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 重复第8步的洗涤过程一次。
10. 短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
11. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入30-100μL DNA洗脱液2.0，12000～15000g室温离心半分钟，所得溶液即基因组DNA。


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·石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒
编号：BTN130888
英文名称：FFPE Total Protein Extraction Kit
规格：50次
石蜡包埋组织是很重要的临床材料，研究其正常细胞和疾病相关的细胞，特别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平，对于判断癌化的进展，癌症的类型的判定，以方便于诊断和治疗有重要的意义，然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水平并不能够真实反映体内细胞的真实状况，因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且加以研究有很重要的意义，本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂和蛋白质抽提试剂，在两种不同的温度条件下温育，可以将被铰链的蛋白质释放出来，经过简单的离心步骤，上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后，可以用于Western Blot 、SDS-PAGE、ELISA、2D电泳或蛋白质芯片分析等，本试剂盒可以使用50次左右。

产品特点：
1. 不含有去污试剂，适用于非染色的标本。
2.可以适用于甲醛浸泡的组织标本。
3. 不需要超速离心，可以同时处理多个标本。

试剂盒组成：

成份	规格
预处理试剂A	100mL
预处理试剂B	5mL
提取试剂	5mL
沉淀试剂	75mL
DTT干粉	80mg
使用手册	1份

储存条件：常温下运输和保存，但DTT和提取试剂需要4℃保存，盛装预处理试剂A的瓶子已经密封，请在使用后，将剩余的预处理试剂A倒入一个有内盖的瓶中，同时盖紧内外盖，以防止挥发。盛装预处理试剂A，B和沉淀试剂的瓶盖要盖紧，同时避免火源。

使用方法：
1. 取两块大约10-15μm厚，100mm2石蜡包埋组织切片到1.5mL的干净离心管中，加入1mL预处理试剂A，高速涡悬震荡30 sec，室温静置5 min，期间偶尔颠倒离心管数次。
2. 加入100μL预处理试剂B，涡悬震荡10sec，再10000rpm(10000g)离心2min，移去上下两层的液体。
3. 用500μL的超纯水清洗脱蜡的组织两次，离心并尽量吸去液体，保留组织块沉淀。
4. 加入100μL提取试剂(用前需要将DTT全部加入到装提取试剂的瓶中，摇晃混匀，未用完的提取试剂需要4℃放置)，盖上盖子，涡悬震荡数秒。
5.在水浴锅中100℃加热20 min，短暂离心一下，再用组织研磨棒将切片组织磨碎。
6.在水浴锅中60℃加热2 hour，期间大约每20 min取出，震荡一次。
7. 4℃，12000rpm(12830 g)离心15 min，小心将上清转移到一个新的1.5mL的干净离心管中。注意：在上清中的蛋白质可以在4℃的环境条件下保存一个星期，如果需要长期保存，请放置在-20℃的环境中，同时避免 反复冻溶，也可以使用我公司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒对上清中的蛋白质直接定量。
8. 加入1mL的沉淀试剂，涡悬震荡10 sec，在4℃的环境中保持10 min。
9. 4℃，12000rpm离心15 min，去除上清，保留沉淀。
10. 加入0.5mL的沉淀试剂，涡悬震荡10 sec，在4℃的环境中保持10 min，再4℃，12000rpm离心15 min，去除上清，保留沉淀，在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。
11. 将固体沉淀溶解于合适的自备的缓冲液中，再4℃，12000rpm离心5 min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等实验。注意：此上清中含有DNA，RNA 残留，所以溶液有些发粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase等消化，有助于减少粘性，但是即使不处理一般不会影响后续实验，用枪头将沉淀捣碎。建议使用含有Thiourea ，Urea，NDSB-201或其它强溶解能力的去污试剂的缓冲液有利于沉淀的完全溶解。

注意事项：
1. 为提高石蜡包埋组织中蛋白质的回收效率，必须尽量减少在切片制作过程中甲醛固定时间，同时在石蜡包埋前彻底脱水，甲醛固定的时间越长，蛋白质的提取回收效率越低。
2. 尽量取用从石蜡包埋组织块中切取的薄片，或没有封闭到载玻片上的没有经过苏木精等染色的切片。
3. 材料越新鲜或甲醛固定时间越短，蛋白质的回收效率越高。
4. 提取试剂中含有含有刺激性的化合物，操作时要戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，沾染皮肤 眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
5. 对于甲醛浸泡的组织样本，每次可以取5-10mg的组织样本，用双蒸水洗涤离心收集后后，直接从步骤4开始操作。
6. 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫实验，可能需要先进行抗原修复程序，但是如果用Western Blot或Dot blot实验，一般情况下没有必要。
7. 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。


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