T4 DNA连接酶（3U/μl)

特别提示：包括T4 DNA连接酶（3U/μl)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 DNA连接酶（3U/μl)
英文名称：T4 DNA Ligase（3U/μl)
产品货号：WH0227
产品规格：60U（Weiss)

本酶在以ATP作辅酶的情况下，可以催化相邻DNA链的5´磷酸基团和3´羟基之间的连接反应。平末端和粘性末端均可，此酶也可以催化双链RNA与双链DNA连接，但不能催化单链核酸的连接。

产品组成：

组分	规格
T4 DNA连接酶	60U
10×T4 DNA ligase Buffer	30μl

储存条件：T4 DNA连接酶和10×T4 DNA ligase Buffer必须放置于-20℃保存，避免反复冻融，10×T4 DNA ligase Buffer建议分装使用

活性单位定义：
1个Weiss活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、20分钟内将1nmol[32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20μl反应体系（50mM Tris-HCl,pH7.5),10 mM MgCl2,10mM DTT,1 mM ATP,25μg/ml BSA,0.12μM （300μg/ml)的5´DNA末端)中，在16℃、30分钟内50%连接HindIII酶切的Lambda DNA产物所需要的酶量。

使用示例：
1．先将10×T4 DNA ligase Buffer在冰上融化，并进行短暂的离心。
2.以10μl连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分：

成分	用量
目的DNA片段	约0.1pmol
载体DNA	约0.01pmol
10×T4 DNA ligase Buffer	1μl
T4 DNA Ligase	0.5-1μl
无菌去离子水	补足到10μl

3.16℃连接过夜。
4.将3～5μl连接产物转化至100μl感受态细胞中。

注意事项：
1.载体DNA和连接片段的摩尔比：对于不同的载体和DNA片段，要取得成功的连接，应分别建立具有不同摩尔数比例的连接反应。在大多数情况下，DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的3～10倍。
2.10×T4 DNA ligase Buffer中含ATP，为避免ATP的降解，建议解冻后的10×T4 DNA ligase Buffer分装成小包装并在-20℃保存。
3.平末端的载体与DNA片断连接时，应首先对载体进行去磷酸化，以防止载体自身环化。
注意：如果向连接反应体系中加入PEG可以促进钝末端的连接，但PEG可能导致cDNA片段克隆产物出现串联体并抑制包装反应。

除了T4 DNA连接酶（3U/μl),，我公司还供应以下相关产品：



名称：RecJf核酸外切酶
货号：BTN130629
规格：1000U
RecJf作用于单链DNA，沿5´→3´方向催化去除单磷酸脱氧核苷酸。RecJf与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达。其催化特性与野生型RecJ相同。与MBP的融合，增强了RecJf的溶解度。当底物为5´端突出了22个核苷酸的DNA时，经RecJf酶切后可得到含有以下三种末端的混合产物：平齐末端、5´突出末端(1-5个核苷酸)和5´凹陷末端(1-8个核苷酸)。RecJf发挥活性时无需5´末端磷酸化。

产品特点：
1．特异性5´→3´单链DNA核酸外切酶；
2．从DNA上切下单磷酸脱氧核苷酸。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。

活性定义：1单位指在50μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内产生0.05nmol可溶于TCA的脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。

名称：ApaI限制性内切酶
货号：SV0046
规格：25KU|5KU|2500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 25%
BalbBuffer 2.1: 25%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，25℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
50,000units/ml。
37℃ 时活性100%。
但 37℃ 条件下，半衰期仅 30 分钟。
甲基化敏感性:
对 dcm 和哺乳动物 CpG甲基化敏感。
注意事项:
Apal是Bsp120l的不完全同裂酶，Apal 酶切产生 3´突出端。
当盐浓度高于 50 5´. . . G G G C C C . . . 3´mM 时，Apal的活性受到抑制。

名称：BsrGI-HF限制性内切酶
货号：SV0230
规格：5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 100%
特性
CutSmart、重组酶、基因工程改造酶、省时酶、高保真酶。
反应条件
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
20,000units/ml。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。

名称：BtsCI限制性内切酶
货号：SV0282
规格：10KU|2KU
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件
CutSmart 缓冲液，50℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
20,000units/ml。
37℃ 时活性
50%。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项
BtsCl是BstF5l的完全同裂酶，是 Fokl的不完全同裂酶。

名称：XbaI RE-Mix限制性内切酶
货号：SV0773
规格：150次
特性:
预混液、重组酶、省时酶。
反应条件:
20 μl反应体系中加入 Xbal RE-Mix和DNA，37℃ 温育。
热失活:65℃ 20 分钟。
甲基化敏感性:
对 dam甲基化敏感。

名称：VentR (exo–) DNA 聚合酶
货号：SV0924
规格：1KU|200U|100U
概述:
VentR DNA聚合酶是较早应用于 PCR的一种高保真耐热 DNA聚合酶，其保真度比 Taq DNA聚合酶高 5 倍。该酶具有高保真性的原因，部分是由于其自身具有 3´→5´ 核酸外切酶校读活性。在 95℃ 温育 1 小时后，仍具有 90% 以上的聚合酶活性。
VentR(exo-) DNA聚合酶是 VentR DNA聚合酶经基因工程改造而得，去除了 3´→5´ 核酸外切酶校读活性，其保真度有所降低，大约比 Taq DNA聚合酶高 2 倍。
来源:
VentR DNA聚合酶纯化自重组 E. coli 菌株，该菌株携带有来自古菌 Thermococcus litoralis的 Vent DNA聚合酶基因。VentR(exo-) DNA聚合酶纯化自重组 E. coli 菌株，该菌株携带有 Vent(D141A/E143A) DNA聚合酶基因，此酶为天然酶经过基因工程改造而得。
浓度:
2,000units/ml。

名称：α1-6 甘露糖苷酶
货号：SV1515
规格：4KU|800U
概述:
α1-6 甘露糖苷酶是一种高特异性的糖苷外切酶，催化寡糖未分支的 α1-6 糖苷键连接的 D-吡喃甘露糖残基酶解。当与 α1-2,3 甘露糖苷酶共同作用时，该酶将从分支的碳水化合物底物中切除α1-6 甘露糖残基。
来源:
基因克隆自木薯细菌性枯萎病菌（Xanthomonas manihotis），在 E. coli 中表达。
反应条件:
1X GlycoBuffer 1 反应缓冲液。添加 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。热失活:65℃ 10 分钟。
随酶提供的试剂:
10X GlycoBuffer 1 反应缓冲液，100X BSA。
比活力:
~137,000 units/mg。
分子量:
58,000 daltons。
质量保证:
无糖苷外切酶污染，无蛋白水解活性。
单位定义:
1 单位指 10 μl 反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内将 1 nmol Manα1-6Manα1-6Man-AMC 中超过 95% 的末端 α-D-甘露糖水解所需要的酶量。
浓度:
40,000 units/ml。
注意事项:
对硝*苯-α-D-吡喃甘露糖不是本酶底物。

名称：精氨酸甲基转移酶2
货号：JN0082
规格：10μg
  精氨酸甲基转移酶可以甲基化蛋白质精氨酸残基上的胍基氮，靶蛋白包括STAT3, FBL, 组蛋白H4等。

催化反应：
2 S-adenosyl-L-methionine + [protein]-L-arginine = 2 S-adenosyl-L-hom℃ysteine + [protein]-N(omega),N(omega)-dimethyl-L-arginine。

动力学常数：
KM=2.6 µM for AdoMet
KM=3.3 µM for H4
Vmax=1.4 nmol/min/mg enzyme toward AdoMet
Vmax=1.5 nmol/min/mg enzyme toward H4

名称：RNase H（5 U/μl)
货号：WH0170
规格：500U|5000U
RNase H是特异性分解RNA-DNA杂交体中的RNA链的核糖核酸内切酶，而对单链和双链RNA分子则几乎没有活性。经RNase H水解后的产物具有5"-P和3"-OH末端。本产品是通过大肠杆菌表达的重组酶。本制品浓度为5U/μl。

产品特点：
·特异性水解RNA-DNA杂交体中的RNA链；
·几乎没有单链、双链RNA分子和DNA分子的水解活性；
·蛋白比活性高，稳定性好。

适用范围：
1．在二代测序（NGS）应用中，主要用于RNA文库构建过程中cDNA第二链的合成。
2．在cDNA第二链合成时除去mRNA。

产品组成：

组分	WH0170-1	WH0170-2
RNase H	500U	5000U
10×RNase H Buffer	300μl	2×1.5ml

储存条件：-25℃~-15℃保存，保质期一年。

贮存液成分：20mM Tris-HCl，100mM KCl，10mM MgCl2，0.1mM EDTA，0.1mM DTT，50%甘油。

单位定义：1单位酶是指在37℃条件下，在1× RNAse H Buffer体系中，20min水解1nmol[3H]标记的DNARNA杂交双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸所需要的酶量。

质量控制：

性质	描述
蛋白纯度	＞99%
酶活性	625U/μg
单链核酸外切酶	500U酶中，＜0.5%
双链核酸外切酶	500U酶中，＜0.1%
双链核酸内切酶	500U酶中，未检出
宿主基因组污染	500U酶中，＜10拷贝
非特异RNAse残留	500U酶中，未检出

使用方法：
在NGS RNA文库构建过程中，一般按终浓度0.1~0.25U/μl的量加入RNA酶H。也可根据实验具体情况来调整用量。
反应条件：37℃，20min。
灭活条件：65℃，10 min。