EHA105（pSoup） 感受态细胞100ul*50

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
EHA105（pSoup） 感受态细胞100ul*50	100ul*50	根癌农杆菌感受态细胞

EHA105（pSoup） 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
化大家鼠肺成纤维细胞;NRm盐酸布比卡因(标准品)Bupivacaine HCl质量规格：标准品,用于含量测定
EFNA1 Others Human 人 EFNA1 / Ephrin-A1 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸布替萘芬Butenafine HCl质量规格：>99%,JP16
胰腺星状细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)卡托普利Captopril质量规格：>98%,USP34,BR,可用于细胞培养
APOA1 Others Mouse 小鼠 ApoA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 卡托普利（标准品）Captopril质量规格：HPLC>99%,标准品
大鼠子宫成纤维细胞完全培养基 100mL卡比多巴(S)-Carbidopa质量规格：>98.5%,BR,可用于细胞培养,一水合物
NSC，大鼠神经干细胞(S)-盐酸氮卓斯汀(S)-Azelastine Hydrochloride质量规格：美国进口
人胚胎皮肤成纤维细胞;HES 人胎盘滋养层细胞完全培养基 100mL阿替洛尔-d7Atenolol-d7质量规格：美国进口
人肺动脉平滑肌细胞cDNAHPASMC cDNA阿托伐他汀Atorvastatin质量规格：美国进口
ERBB3 Others Rat 大鼠 HER3 / ErbB3 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-羟基阿托伐他汀内酯4-Hydroxy Atorvastatin Lactone质量规格：美国进口
人破骨细胞完全培养基 100mL2-羟基阿托伐他汀内酯2-Hydroxy Atorvastatin Lactone 质量规格：美国进口
香橙素，香树素 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin3,IL-3ELISA试剂盒兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T
小构树醇 B HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinA,IgAELISA试剂盒兔子免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
小叶九里香内酯 HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinE,IgEELISA试剂盒兔子免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒规格：96T/48T
小芸木香豆精 HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinG,IgGELISA试剂盒兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T
泻根醇酸 HPLC≥98% 5mg Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISA试剂盒兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
辛可宁 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin,INSELISA试剂盒兔子胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
辛夷烯酮 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
新比克白芷内酯 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
新槐胺 HPLC≥98% 5mg RabbitoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
星鱼甾醇 HPLC≥98% 5mg RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit兔血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
EHA105（pSoup） 感受态细胞100ul*50RabbitIerleukin3,IL-3ELISA试剂盒兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T 腺华素 HPLC≥98% 5mg
RabbitIerleukin3,IL-3ELISA试剂盒兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T 香橙素，香树素 HPLC≥98% 5mg
rabbitImmunoglobulinA,IgAELISA试剂盒兔子免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 小构树醇 B HPLC≥98% 5mg
rabbitImmunoglobulinE,IgEELISA试剂盒兔子免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒规格：96T/48T 小叶九里香内酯 HPLC≥98% 5mg
rabbitImmunoglobulinG,IgGELISA试剂盒兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T 小芸木香豆精 HPLC≥98% 5mg
Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISA试剂盒兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒规格：96T/48T 泻根醇酸 HPLC≥98% 5mg
rabbitInsulin,INSELISA试剂盒兔子胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T 辛可宁 HPLC≥98% 5mg
rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T 辛夷烯酮 HPLC≥98% 5mg
rabbitInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T 新比克白芷内酯 HPLC≥98% 5mg
RabbitoponinⅠ,Tn-Ⅰ兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 新槐胺 HPLC≥98% 5mg
EHA105（pSoup） 感受态细胞100ul*50操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。