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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
58
- 英文名：
F-TOP10 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*20
F-TOP10 感受态细胞100ul*20培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：F-TOP10 感受态细胞100ul*20
规格：100ul*20
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
F-TOP10 感受态细胞100ul*20注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
人胰腺星状细胞完全培养基 100mL异槲皮苷(标准品)Isoquercitrin质量规格：HPLC≥98%，标准品
BJ细胞，人皮肤成纤维细胞系 克柔念珠菌 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B2异茴芹内酯Isopimpinellin质量规格：HPLC≥98%，标准品
FAM19A4 Protein Human 重组人 FAM19A4 / TAFA4 蛋白 (Fc 标签)异类叶升麻苷；异毛蕊花糖苷（标准品）Isoacteoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
MDA-MB-453(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 狗 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照) 异绿原酸A(标准品)Isochlorogenic acid A质量规格：HPLC≥98%，标准品
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)异绿原酸B(标准品)Isochlorogenic acid B质量规格：HPLC≥98%，标准品
人脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基 100mL潮霉素B(罗氏原装)Hygromycin B质量规格：罗氏原装,浓度50mg/ml
COS-6细胞，非洲绿猴肾细胞 A375(人类恶性色素瘤) 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1芹菜苷; 芹黄苷Apiin 质量规格：HPLC≥98%，标准品
EFNA5 Protein Mouse 重组小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,野决明苷Chrysoeriol 7-O-glucoside质量规格：HPLC≥97%，标准品
BC-021(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 绿色荧光蛋白标记小鼠子细胞;U14-GFP山柰酚-3-O-芸香糖苷(标准品)Kaempferol-3-O-rutinoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
人间充质干细胞-肝脏总RNAHMSC-hp NA泮托拉唑钠一水物Pantoprazole Sodium质量规格：>98%,BR
异补骨脂素 HPLC≥98% 20mg INSULIN蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
异橙黄酮 HPLC≥98% 20mg INSULIN蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
异丹酚酸B HPLC≥98% 20mg IOV膜性囊泡高质化试剂盒10
异丹叶大黄素 HPLC≥98% 20mg IP3R受体蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
异丁酰紫草素 HPLC≥98% 20mg IP3R受体蛋白表达检测试剂盒20
异东莨菪内酯 HPLC≥98% 10mg IP3R受体蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
异东莨菪内酯 HPLC≥98% 20mg ISCOVE’SMDM培养基1/10升(片剂)
异莪术烯醇 HPLC≥98% 20mg JM109电转感受态细菌5X100微升
异肥皂草苷 HPLC≥98% 10mg JM109钙转感受态细菌5X200微升
异佛手柑内酯 HPLC≥98% 20mg JM109细菌1毫升
F-TOP10 感受态细胞100ul*20INSULIN蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 异补骨脂素 HPLC≥98% 20mg
INSULIN蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 异橙黄酮 HPLC≥98% 20mg
IOV膜性囊泡高质化试剂盒10 异丹酚酸B HPLC≥98% 20mg
IP3R受体蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 异丹叶大黄素 HPLC≥98% 20mg
IP3R受体蛋白表达检测试剂盒20 异丁酰紫草素 HPLC≥98% 20mg
IP3R受体蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 异东莨菪内酯 HPLC≥98% 10mg
ISCOVE’SMDM培养基1/10升(片剂) 异东莨菪内酯 HPLC≥98% 20mg
JM109电转感受态细菌5X100微升 异莪术烯醇 HPLC≥98% 20mg
JM109钙转感受态细菌5X200微升 异肥皂草苷 HPLC≥98% 10mg
JM109细菌1毫升 异佛手柑内酯 HPLC≥98% 20mg
F-TOP10 感受态细胞100ul*20操作说明：
1. 0.1
cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：F-TOP10 感受态细胞100ul*20
规格：100ul*20
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
F-TOP10 感受态细胞100ul*20注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
人胰腺星状细胞完全培养基 100mL异槲皮苷(标准品)Isoquercitrin质量规格：HPLC≥98%，标准品
BJ细胞，人皮肤成纤维细胞系 克柔念珠菌 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B2异茴芹内酯Isopimpinellin质量规格：HPLC≥98%，标准品
FAM19A4 Protein Human 重组人 FAM19A4 / TAFA4 蛋白 (Fc 标签)异类叶升麻苷；异毛蕊花糖苷（标准品）Isoacteoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
MDA-MB-453(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 狗 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照) 异绿原酸A(标准品)Isochlorogenic acid A质量规格：HPLC≥98%，标准品
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)异绿原酸B(标准品)Isochlorogenic acid B质量规格：HPLC≥98%，标准品
人脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基 100mL潮霉素B(罗氏原装)Hygromycin B质量规格：罗氏原装,浓度50mg/ml
COS-6细胞，非洲绿猴肾细胞 A375(人类恶性色素瘤) 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1芹菜苷; 芹黄苷Apiin 质量规格：HPLC≥98%，标准品
EFNA5 Protein Mouse 重组小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,野决明苷Chrysoeriol 7-O-glucoside质量规格：HPLC≥97%，标准品
BC-021(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 绿色荧光蛋白标记小鼠子细胞;U14-GFP山柰酚-3-O-芸香糖苷(标准品)Kaempferol-3-O-rutinoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
人间充质干细胞-肝脏总RNAHMSC-hp NA泮托拉唑钠一水物Pantoprazole Sodium质量规格：>98%,BR
异补骨脂素 HPLC≥98% 20mg INSULIN蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
异橙黄酮 HPLC≥98% 20mg INSULIN蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
异丹酚酸B HPLC≥98% 20mg IOV膜性囊泡高质化试剂盒10
异丹叶大黄素 HPLC≥98% 20mg IP3R受体蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
异丁酰紫草素 HPLC≥98% 20mg IP3R受体蛋白表达检测试剂盒20
异东莨菪内酯 HPLC≥98% 10mg IP3R受体蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
异东莨菪内酯 HPLC≥98% 20mg ISCOVE’SMDM培养基1/10升(片剂)
异莪术烯醇 HPLC≥98% 20mg JM109电转感受态细菌5X100微升
异肥皂草苷 HPLC≥98% 10mg JM109钙转感受态细菌5X200微升
异佛手柑内酯 HPLC≥98% 20mg JM109细菌1毫升
F-TOP10 感受态细胞100ul*20INSULIN蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 异补骨脂素 HPLC≥98% 20mg
INSULIN蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 异橙黄酮 HPLC≥98% 20mg
IOV膜性囊泡高质化试剂盒10 异丹酚酸B HPLC≥98% 20mg
IP3R受体蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 异丹叶大黄素 HPLC≥98% 20mg
IP3R受体蛋白表达检测试剂盒20 异丁酰紫草素 HPLC≥98% 20mg
IP3R受体蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 异东莨菪内酯 HPLC≥98% 10mg
ISCOVE’SMDM培养基1/10升(片剂) 异东莨菪内酯 HPLC≥98% 20mg
JM109电转感受态细菌5X100微升 异莪术烯醇 HPLC≥98% 20mg
JM109钙转感受态细菌5X200微升 异肥皂草苷 HPLC≥98% 10mg
JM109细菌1毫升 异佛手柑内酯 HPLC≥98% 20mg
F-TOP10 感受态细胞100ul*20操作说明：
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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文献和实验相关实验
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TOP10 chemically competent cells
Overview This protocol is a variant of the Hanahan protocol [1] using CCMB80 buffer for DH10B, TOP10 and MachI strains. It builds on Example 2 of the Bloom05 patent as well. This protocol has been tested on TOP10, MachI and BL21(DE3) cells
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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