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39
- 英文名：
OrigamiB(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*50
产品名称：OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50
规格：100ul*50
分类：表达感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50操作说明：
1. 0.1
cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
HUVE-12/CRL2480细胞，人脐静脉内皮细胞 长臂猿淋巴瘤,MLA-144细胞 人真皮淋巴内皮细胞总RNAHDLEC NA盐酸头孢他美酯Cefetamet pivoxil hydrochloride质量规格：≥653µg/mg,BR
QSG-7701(人正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2盐酸头孢他美酯(标准品)Cefetamet pivoxil hydrochloride质量规格：效价测定
EL4(小鼠淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0255A875(人色素瘤细胞)5×106cells/瓶×2 豚鼠胚胎细胞;104C1L-生物喋呤L-Biopterin质量规格：>98%,BR
杂交瘤(B类);C3110D2E11渥曼青霉素Wortmannin质量规格：>98%,美国进口,PI3K/AKT通路的抑制剂
MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 溴化新斯的明Neostigmine bromide质量规格：>98%
HCT-8/VCR细胞，耐长春新碱结肠癌细胞系 人色素瘤细胞,HME6细胞 表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KB杯苋甾酮（标准品）Cyasterone质量规格：HPLC≥98%，标准品
H4(人脑神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2四氢小檗碱（标准品）Tetrahydroberberine,THB质量规格：HPLC≥98%，标准品
CD274 Others Human 人 PD-L1 人细胞裂解液 (阳性对照) 通关藤苷I（标准品）Tenacissoside I质量规格：HPLC≥98%，标准品
人肝脏星形细胞总RNAHHSteC NA通关藤苷G（标准品）Tenacissoside G质量规格：HPLC≥98%，标准品
JAM2 Others Rat 大鼠 JAM-2 / JAM-B 人细胞裂解液 (阳性对照) 白花前胡丙素（标准品）Praeruptorin C质量规格：HPLC≥98%，标准品
盐酸氟西汀（标准品） Fluoxetine Hydrochloride 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠迟现抗原(VLA)ELISA检测试剂盒Ratverylateappearingaigen,VLAELISAKit 96T/48T
马来酸氟伏沙明 Fluvoxamine maleate 质量规格：>98.5%,BP2007 大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒RatEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T
马来酸氟伏沙明（标准品） Fluvoxamine maleate 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠雌二醇受体(ER)ELISA检测试剂盒ratEsadiolreceptor,ERELISAKit 96T/48T
福美斯坦 Formestane 质量规格：>99% 大鼠雌激素(E)ELISA检测试剂盒Ratesogen,EELISAKit 96T/48T
福美斯坦(标准品) Formestane 质量规格：HPLC≥98.0%,标准品 大鼠雌激素受体(ER)ELISA检测试剂盒RatEsogeeceptor,ERELISAKit 96T/48T
福辛普利钠 Fosinopril sodium 质量规格：度≥99.0%（HPLC） 大鼠雌三醇(E3)ELISA检测试剂盒RatEsiol,E3ELISAKit 96T/48T
呋塞米（速尿） Furosemide 质量规格：>99%,BR 大鼠促黄体激素(LH)ELISA检测试剂盒Ratleoopichormone,LHELISAKit 96T/48T
呋塞米（标准品） Furosemide 质量规格：含量测定 大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA检测试剂盒RatThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 96T/48T
吉非罗齐 Gemfibrozil 质量规格：>99%,USP,可用于细胞培养 大鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISA检测试剂盒Ratthyroopin-releasinghormone,HELISAKIT 96T/48T
吉非罗齐（标准品） Gemfibrozil 质量规格：含量测定 大鼠促卵泡素(FSH)ELISA检测试剂盒ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 96T/48T
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒RatSuperOxidaseDimase,SOD 96T/48T 盐酸氟西汀 Fluoxetine Hydrochloride 质量规格：>99%,BR
大鼠迟现抗原(VLA)ELISA检测试剂盒Ratverylateappearingaigen,VLA 96T/48T 盐酸氟西汀（标准品） Fluoxetine Hydrochloride 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒RatEsadiol,E2 96T/48T 马来酸氟伏沙明 Fluvoxamine maleate 质量规格：>98.5%,BP2007
大鼠雌二醇受体(ER)ELISA检测试剂盒ratEsadiolreceptor,ER 96T/48T 马来酸氟伏沙明（标准品） Fluvoxamine maleate 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠雌激素(E)ELISA检测试剂盒Ratesogen,E 96T/48T 福美斯坦 Formestane 质量规格：>99%
大鼠雌激素受体(ER)ELISA检测试剂盒RatEsogeeceptor,ER 96T/48T 福美斯坦(标准品) Formestane 质量规格：HPLC≥98.0%,标准品
大鼠雌三醇(E3)ELISA检测试剂盒RatEsiol,E3 96T/48T 福辛普利钠 Fosinopril sodium 质量规格：度≥99.0%（HPLC）
大鼠促黄体激素(LH)ELISA检测试剂盒Ratleoopichormone,LH 96T/48T 呋塞米（速尿） Furosemide 质量规格：>99%,BR
大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA检测试剂盒RatThyroidStimulatingHormone,TSH 96T/48T 呋塞米（标准品） Furosemide 质量规格：含量测定
大鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISA检测试剂盒Ratthyroopin-releasinghormone,H 96T/48T 吉非罗齐 Gemfibrozil 质量规格：>99%,USP,可用于细胞培养
规格：100ul*50
分类：表达感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50操作说明：
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
HUVE-12/CRL2480细胞，人脐静脉内皮细胞 长臂猿淋巴瘤,MLA-144细胞 人真皮淋巴内皮细胞总RNAHDLEC NA盐酸头孢他美酯Cefetamet pivoxil hydrochloride质量规格：≥653µg/mg,BR
QSG-7701(人正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2盐酸头孢他美酯(标准品)Cefetamet pivoxil hydrochloride质量规格：效价测定
EL4(小鼠淋巴瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0255A875(人色素瘤细胞)5×106cells/瓶×2 豚鼠胚胎细胞;104C1L-生物喋呤L-Biopterin质量规格：>98%,BR
杂交瘤(B类);C3110D2E11渥曼青霉素Wortmannin质量规格：>98%,美国进口,PI3K/AKT通路的抑制剂
MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 溴化新斯的明Neostigmine bromide质量规格：>98%
HCT-8/VCR细胞，耐长春新碱结肠癌细胞系 人色素瘤细胞,HME6细胞 表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KB杯苋甾酮（标准品）Cyasterone质量规格：HPLC≥98%，标准品
H4(人脑神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2四氢小檗碱（标准品）Tetrahydroberberine,THB质量规格：HPLC≥98%，标准品
CD274 Others Human 人 PD-L1 人细胞裂解液 (阳性对照) 通关藤苷I（标准品）Tenacissoside I质量规格：HPLC≥98%，标准品
人肝脏星形细胞总RNAHHSteC NA通关藤苷G（标准品）Tenacissoside G质量规格：HPLC≥98%，标准品
JAM2 Others Rat 大鼠 JAM-2 / JAM-B 人细胞裂解液 (阳性对照) 白花前胡丙素（标准品）Praeruptorin C质量规格：HPLC≥98%，标准品
盐酸氟西汀（标准品） Fluoxetine Hydrochloride 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠迟现抗原(VLA)ELISA检测试剂盒Ratverylateappearingaigen,VLAELISAKit 96T/48T
马来酸氟伏沙明 Fluvoxamine maleate 质量规格：>98.5%,BP2007 大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒RatEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T
马来酸氟伏沙明（标准品） Fluvoxamine maleate 质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠雌二醇受体(ER)ELISA检测试剂盒ratEsadiolreceptor,ERELISAKit 96T/48T
福美斯坦 Formestane 质量规格：>99% 大鼠雌激素(E)ELISA检测试剂盒Ratesogen,EELISAKit 96T/48T
福美斯坦(标准品) Formestane 质量规格：HPLC≥98.0%,标准品 大鼠雌激素受体(ER)ELISA检测试剂盒RatEsogeeceptor,ERELISAKit 96T/48T
福辛普利钠 Fosinopril sodium 质量规格：度≥99.0%（HPLC） 大鼠雌三醇(E3)ELISA检测试剂盒RatEsiol,E3ELISAKit 96T/48T
呋塞米（速尿） Furosemide 质量规格：>99%,BR 大鼠促黄体激素(LH)ELISA检测试剂盒Ratleoopichormone,LHELISAKit 96T/48T
呋塞米（标准品） Furosemide 质量规格：含量测定 大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA检测试剂盒RatThyroidStimulatingHormone,TSHELISAKit 96T/48T
吉非罗齐 Gemfibrozil 质量规格：>99%,USP,可用于细胞培养 大鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISA检测试剂盒Ratthyroopin-releasinghormone,HELISAKIT 96T/48T
吉非罗齐（标准品） Gemfibrozil 质量规格：含量测定 大鼠促卵泡素(FSH)ELISA检测试剂盒ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 96T/48T
OrigamiB(DE3) 感受态细胞100ul*50大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测试剂盒RatSuperOxidaseDimase,SOD 96T/48T 盐酸氟西汀 Fluoxetine Hydrochloride 质量规格：>99%,BR
大鼠迟现抗原(VLA)ELISA检测试剂盒Ratverylateappearingaigen,VLA 96T/48T 盐酸氟西汀（标准品） Fluoxetine Hydrochloride 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒RatEsadiol,E2 96T/48T 马来酸氟伏沙明 Fluvoxamine maleate 质量规格：>98.5%,BP2007
大鼠雌二醇受体(ER)ELISA检测试剂盒ratEsadiolreceptor,ER 96T/48T 马来酸氟伏沙明（标准品） Fluvoxamine maleate 质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠雌激素(E)ELISA检测试剂盒Ratesogen,E 96T/48T 福美斯坦 Formestane 质量规格：>99%
大鼠雌激素受体(ER)ELISA检测试剂盒RatEsogeeceptor,ER 96T/48T 福美斯坦(标准品) Formestane 质量规格：HPLC≥98.0%,标准品
大鼠雌三醇(E3)ELISA检测试剂盒RatEsiol,E3 96T/48T 福辛普利钠 Fosinopril sodium 质量规格：度≥99.0%（HPLC）
大鼠促黄体激素(LH)ELISA检测试剂盒Ratleoopichormone,LH 96T/48T 呋塞米（速尿） Furosemide 质量规格：>99%,BR
大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA检测试剂盒RatThyroidStimulatingHormone,TSH 96T/48T 呋塞米（标准品） Furosemide 质量规格：含量测定
大鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISA检测试剂盒Ratthyroopin-releasinghormone,H 96T/48T 吉非罗齐 Gemfibrozil 质量规格：>99%,USP,可用于细胞培养
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文献和实验相关实验
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择，现系统地解答一下，供新手借鉴。
pETBlue 载体代表了新型表达载体，它具备所有广受欢迎的克隆载体的最理想特点和 T7 驱动蛋白表达的完全功能。目标基因以相对于修饰的大肠杆菌 tet 启动子的反义方向插到 lacZ a - 肽编码区，因此可进行蓝 / 白斑筛选。正确定位于目标基因正义方向上游的 T7 转录和翻译信号使表达成为可能。与标准 pET 载体一样，通过转化 λ DE3 溶原菌并用 IPTG 诱导或通过 l CE6 感染原始宿主菌生产目标蛋白。 优点 · 蓝 / 白斑筛选，便于克隆 · 高拷贝数，质粒 DNA 高产 ·
。 Origami TM 和 OrigamiB 菌株为 trxB/gor 双突变，这两个酶是主要还原途径的关键酶。 Origami 和 OrigamiB 宿主菌的主要优点是能形成正确折迭的含有二硫键的蛋白。新的 Rosetta TM 菌株补充了四种大肠杆菌稀有密码子的 tRNA ，改善了由于密码子使用频率不同而引起的一些真核蛋白低表达。其它菌株背景包括 K-12 菌株 HMS174 和 NovaBlue ，象 BLR 一样为 recA - 。这些菌株可稳定表达其产物可能导致 DE3 噬菌体丢失的某些目标
和 OrigamiB 宿主菌的主要优点是能形成正确折迭的含有二硫键的蛋白。新的 Rosetta TM 菌株补充了四种大肠杆菌稀有密码子的 tRNA ，改善了由于密码子使用频率不同而引起的一些真核蛋白低表达。其它菌株背景包括 K-12 菌株 HMS174 和 NovaBlue ，象 BLR 一样为 recA - 。这些菌株可稳定表达其产物可能导致 DE3 噬菌体丢失的某些目标基因。由于存在 F 附加体编码的高亲和力 lacIq 阻遏蛋白， NovaBlue 为一个有用的严紧型宿主菌。此外， Novagen 提供
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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