Ar A4 感受态细胞100ul*10

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
Ar A4 感受态细胞100ul*10	100ul*10	发根农杆菌感受态细胞

Ar A4 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
正常大鼠肾细胞;NRK盐霉素,沙利霉素Salinomycin质量规格：assay 12%~24%
WI-38细胞， 人胚肺细胞 小鼠肺成纤维细胞,L929细胞 CL-00025637(人膀胱癌细胞)5×106cells/瓶×2仙茅苷Curculigoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
SMMC-7721(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2丹皮酚原苷；牡丹酚原甙Paeonolide质量规格：HPLC≥98%，标准品
HDMEC-c 人真皮微血管内皮细胞(HDMEC)来自少年者 500,000cells 肺微血管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)氧化槐定碱(标准品)oxysophoridine质量规格：HPLC≥98%，标准品
叙利亚仓鼠细胞系;Syrian Hamster AV12一叶秋碱 ，一叶萩碱Securinine质量规格：HPLC≥98%，对照品
CM-R082大鼠骨细胞完全培养基100mLN-(羟甲基)烟酰胺N-(Hydroxymethyl)nicotinamide质量规格：美国进口
BSG823细胞，人胃癌细胞 人神经上皮瘤细胞,SK-N-SH细胞 瘤牛皮肤细胞;BIN-S1ε-聚赖氨酸Epsilon Polylysine 质量规格：溶解性数据为19.8,分子量小于5000
CNE(人鼻咽癌细胞) 5×106cells/瓶×2普罗雌1Promestriene质量规格：≥99.0%,BR
FCGR3B Others Human 人 CD16b / FCGR3B 人细胞裂解液 (阳性对照) 波生坦(水合物)Bosentan hydrate质量规格：≥98.5%（HPLC）,BR,一水合物
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H157波生坦水合(标准品)Bosentan hydrate质量规格：HPLC≥98%,标准品
五味子酯乙 HPLC≥98% 20mg Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts,Hb-AGEELISAKit 人血红蛋白晚期糖基化终末产物(Hb-AGE)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西贝母碱 HPLC≥98% 20mg Humanheparansulfate,HSELISAKit 人硫酸类肝素(HS)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西贝母碱苷 HPLC≥98% 10mg Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISAKit 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西伯利亚远志口山酮B HPLC≥98% 20mg HumanHerpessimplexvirus,HSV-Ag1ELISAKit 人单疱疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西伯利亚远志糖A HPLC≥98% 20mg HumanHerpessimplexvirusⅠaibody,HSVⅠ-AbELISAKit 人单疱疹病毒Ⅰ型抗体(HSVⅠ-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西伯利亚远志糖A HPLC≥95% 20mg humanherpesvirusesRFLP基因分析试剂盒20
西红花苷 鉴别 20mg HumanHexokinase,HKELISAKit 人己糖激酶(HK)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西红花苷I HPLC≥98% 20mg Humanhistatin5ELISAKit 人富组蛋白(histatin5)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西红花苷II HPLC≥98% 20mg HumanICEprotease-activatingfactor,IRAPELISAKit 人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
西红柿碱 HPLC≥98% 10mg HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit 人缺血修饰白蛋白(IMA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Ar A4 感受态细胞100ul*10Humanhemoglobin-advancedglycosylationendproducts,Hb-AGE 人血红蛋白晚期糖基化终末产物(Hb-AGE)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 五味子酯乙 HPLC≥98% 20mg
Humanheparansulfate,HS 人硫酸类肝素(HS)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西贝母碱 HPLC≥98% 20mg
Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPG 人硫酸肝素糖蛋白(HSPG)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西贝母碱苷 HPLC≥98% 10mg
HumanHerpessimplexvirus,HSV-Ag1 人单疱疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西伯利亚远志口山酮B HPLC≥98% 20mg
HumanHerpessimplexvirusⅠaibody,HSVⅠ-Ab 人单疱疹病毒Ⅰ型抗体(HSVⅠ-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西伯利亚远志糖A HPLC≥98% 20mg
humanherpesvirusesRFLP基因分析试剂盒20 西伯利亚远志糖A HPLC≥95% 20mg
HumanHexokinase,HK 人己糖激酶(HK)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西红花苷 鉴别 20mg
Humanhistatin5 人富组蛋白(histatin5)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西红花苷I HPLC≥98% 20mg
HumanICEprotease-activatingfactor,IRAP 人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西红花苷II HPLC≥98% 20mg
HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMA 人缺血修饰白蛋白(IMA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 西红柿碱 HPLC≥98% 10mg
Ar A4 感受态细胞100ul*10操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。