S17-1 感受态细胞100ul*50

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
S17-1 感受态细胞100ul*50	100ul*50	克隆感受态细胞

S17-1 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
R 1610仓鼠肺细胞 R 1610 hamster lung cells DMEM+10%FBS乙基2-(6-氨基-2,3-二氯苄)甘氨酸(阿那格雷杂质A)Ethyl 2-(6-Amino-2,3-dichlorobenzyl)glycine(Anagrelide Impurity A)质量规格：美国进口
FGF10 Protein Human 重组人 FGF10 蛋白5-乙酰氧基阿那格雷5-Acetoxy Anagrelide质量规格：美国进口
Chang liver (CCL13) (人张氏肝细胞) 5×106cells/瓶×2 人心脏微血管内皮细胞HCMEC伪伐地那非Pseudo Vardenafil质量规格：美国进口
直肠癌组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1mlN-去乙基伐地那非N-Desethyl Vardenafil质量规格：美国进口
PDE9A Others Human 人 PDE9A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 伐地那非二盐酸Vardenafil Dihydrochloride Salt质量规格：美国进口
小鼠B淋巴细胞杂交瘤细胞;SH2 小鼠肠粘膜上皮细胞完全培养基 100mL丙溴1(标准品)Profenofos质量规格：分析标准品
MN-c, 小鼠皮质神经元 Mouse吡丙(分析标准品,98.5%)Pyriproxifen质量规格：分析标准品,98.5%
KIT Others Mouse 小鼠 c-kit / CD117 人细胞裂解液 (阳性对照) 稻丰散(0.105mg/ml)Phenthoate solution质量规格：0.105mg/ml
人急性T淋巴细胞白血病细胞;Jurkat, Clone E6-1敌稗标准溶液(0.100mg/ml)Propanil solution质量规格：0.100mg/ml
CD3D & CD3E Others Human 人 CD3D & CD3E Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 伏杀(标准品)Phosalone质量规格：分析标准品
胰蛋白酶1:2500  Trypsin 1:2500 from Porcine pancreas  质量规格：>2500U/MG 人单胺氧化酶(MAO)免疫试剂盒 Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit
阿利苯多  Alibendol  质量规格：>98%,BR 人单疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgG)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgG)ELISA kit
核糖核酸酶A(美仑)；RNase A;核糖核酸酶I  Ribonuclease A from bovine pancreas  质量规格：≥50 U/mg,美仑 人单疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgM)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgM)ELISA kit
5‘-吡哆醛，一水  Pyridoxal 5-phosphate  质量规格：>98%,BR 人单疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgG)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)aibody(IgG)ELISA Kit
NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(罗氏)  Coenzyme II reduced tetrasodium salt(NADPH)  质量规格：>95%,罗氏进分 人单疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgM)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)aibody(IgM)ELISA kit
NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(美仑)  Coenzyme II reduced tetrasodium salt(NADPH)  质量规格：>97%,国产美仑 人单疱疹病毒Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒 Human Herpes simplexvirus Ⅱ IgG aibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit
葡萄糖氧化酶  Glucose oxidase  质量规格：BR,>200U/mg 人单疱疹病毒Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒 Human Herpes simplexvirus Ⅱ IgM aibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit
溶菌酶(蛋清)  Lysozyme,from egg white  质量规格：2万U/mg,分子生物学级 人单疱疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)免疫试剂盒 Human Herpes simplex virus,HSV-Ag1 ELISA Kit
HRP;辣根过氧化物酶  Peroxidase, Horseradish(HRP)  质量规格：BR,RZ>2.5,活性>250U/mg 人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫试剂盒 Human MCP-1 ELISA kit
透明质酸酶  Hyaluronidase  质量规格：≥500IU/mg,BR,牛源提取 人单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫试剂盒 Human MCP-2 ELISA kit
S17-1 感受态细胞100ul*50人大内皮素(Big ET-1)免疫试剂盒 Human Big Endothelin,Big ET-1 ELISA Kit 黄嘌呤氧化酶(XOD)  Xanthine Oxidase from bovine milk  质量规格：BR，>7U/MG, powder
人大疱性类天疱疮抗体(BP)免疫试剂盒 Human Bullous Pemphigoid,BP ELISA Kit 酰化酶,L-氨基酰化酶  Acylase from Aspergilus sp.  质量规格：酶活力≥30000u/g
人带3蛋白(Band3)免疫试剂盒 Human Band3 protein ELISA kit 胰蛋白酶1:250  Trypsin 1:250 fromPorcine pancreas  质量规格：>250U/mg,BR
人单胺氧化酶(MAO)免疫试剂盒 Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit 胰蛋白酶1:2500  Trypsin 1:2500 from Porcine pancreas  质量规格：>2500U/MG
人单疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgG)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgG)ELISA kit 阿利苯多  Alibendol  质量规格：>98%,BR
人单疱疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgM)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)aibody(IgM)ELISA kit 核糖核酸酶A(美仑)；RNase A;核糖核酸酶I  Ribonuclease A from bovine pancreas  质量规格：≥50 U/mg,美仑
人单疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgG)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)aibody(IgG)ELISA Kit 5‘-吡哆醛，一水  Pyridoxal 5-phosphate  质量规格：>98%,BR
人单疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgM)免疫试剂盒 Human herpes simplexvirus Ⅰ(HSVⅠ)aibody(IgM)ELISA kit NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(罗氏)  Coenzyme II reduced tetrasodium salt(NADPH)  质量规格：>95%,罗氏进分
人单疱疹病毒Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒 Human Herpes simplexvirus Ⅱ IgG aibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(美仑)  Coenzyme II reduced tetrasodium salt(NADPH)  质量规格：>97%,国产美仑
人单疱疹病毒Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒 Human Herpes simplexvirus Ⅱ IgM aibody,HSVⅡ-Ab ELISA Kit 葡萄糖氧化酶  Glucose oxidase  质量规格：BR,>200U/mg
S17-1 感受态细胞100ul*50操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。