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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
56
- 英文名:
B834(DE3) 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*50
| 产品名称 | 包装 | 分类 |
| B834(DE3) 感受态细胞100ul*50 | 100ul*50 | 克隆感受态细胞 |
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?
答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?
答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
TSPAN7 Others Cynomolgus 食蟹猴 TALLA-1 / TSPAN7 人细胞裂解液 (阳性对照) 愈创甘油(标准品)Guaifenesin质量规格:含量测定
淋巴管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)哌丁(标准品)Cloperastine hydrochloride质量规格:供TCL鉴别用
CNE-1细胞,高分化鼻咽癌细胞 人卵巢癌细胞,8910PM细胞 人前脂肪细胞-内脏裂解物HPA-v L甘露醇(标准品)Mannitol;D-Mannitol质量规格:含量测定
EB病毒转化的绒猴淋巴细胞;B95-8甘露醇(标准品)Mannitol;D-Mannitol质量规格:供HPLC法测定
IDS Others Human 人 Iduronate 2-Sulfatase / IDS 人细胞裂解液 (阳性对照) 依克立达Elacridar;GF120918;GW0918质量规格:>98%,P糖蛋白抑制剂
SMPD1 Others Mouse 小鼠 SMPD1 / ASM 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 丹蒽醌(标准品)1,8-Dihydroxyanthraquinone质量规格:含量测定
CM-H030人外周血白细胞完全培养基100mL己定(标准品)Chlorhexidine hydrochloride质量规格:HPLC法含量测定
MG-63, 人骨肉瘤细胞 肝癌细胞,CBRH-7919细胞 TT(人骨髓样甲状腺癌细胞)盐酸甲氧那明(标准品)Methoxyphenamine HCl质量规格:含量测定
正常小鼠Sertoli细胞;TM4愈创木酚磺酸钾(标准品)Potassium guaiacolsulfonate hemihydrate质量规格:供HPLC法含量测定用
CD7 Others Human 人 CD7 人细胞裂解液 (阳性对照) 棓丙酯(标准品)Propyl gallate质量规格:含量测定
鸢尾苷(标准品) Tectoridin 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠精酸/丝酸丰富剪接因子4(SRSF4)ELISA试剂盒 ,英文名: SRSF4 ELISA Kit
鸢尾黄素(标准品) Tectorigenin 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠精酸加压素受体1B(AVPR1B)ELISA试剂盒 ,英文名: AVPR1B ELISA Kit
原B2(标准品) Procyanidin B2 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠精酸加压素原(VP)ELISA试剂盒 ,英文名: VP ELISA Kit
原人参二醇(标准品) Protopanaxdiol 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠精酸酶(Arg)ELISA试剂盒 ,英文名: Arg ELISA Kit
原人参三醇(标准品) Protopanaxatriol 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠静止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)ELISA试剂盒 ,英文名: QSOX1 ELISA Kit
原薯蓣皂苷(标准品) Protodioscin 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2)ELISA试剂盒 ,英文名: MCP-1/CCL2 ELISA Kit
原苏木素B/原巴西苏木素(标准品) Protosappanin B 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒 ,英文名: MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit
远志酸(标准品) Polygalacic acid 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA检测试剂盒MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISAkit 96T/48T
远志皂苷元(标准品) Senegenin 质量规格:HPLC≥98%,标准品 小鼠巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)ELISA试剂盒 ,英文名: MCSF ELISA Kit
月桂烯(香叶烯) Myrcene 质量规格:HPLC≥80%,标准品 小鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒 ,英文名: M-CSF ELISA Kit
B834(DE3) 感受态细胞100ul*50小鼠金属硫蛋白2(MT-2)ELISA试剂盒 ,英文名: MT-2 ELISA Kit 鹰嘴豆芽素A Biochanin A 质量规格:>98%,BR
小鼠晶状体蛋白αB(CRYαB)ELISA试剂盒 ,英文名: CRYαB ELISA Kit 柚皮苷,川陈皮素 Naringin 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠精胺氧化酶(SMOX)ELISA试剂盒 ,英文名: SMOX ELISA Kit 羽扇豆醇(标准品) Lupeol 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠精酸/丝酸丰富剪接因子4(SRSF4)ELISA试剂盒 ,英文名: SRSF4 ELISA Kit 鸢尾苷(标准品) Tectoridin 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠精酸加压素受体1B(AVPR1B)ELISA试剂盒 ,英文名: AVPR1B ELISA Kit 鸢尾黄素(标准品) Tectorigenin 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠精酸加压素原(VP)ELISA试剂盒 ,英文名: VP ELISA Kit 原B2(标准品) Procyanidin B2 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠精酸酶(Arg)ELISA试剂盒 ,英文名: Arg ELISA Kit 原人参二醇(标准品) Protopanaxdiol 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠静止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)ELISA试剂盒 ,英文名: QSOX1 ELISA Kit 原人参三醇(标准品) Protopanaxatriol 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2)ELISA试剂盒 ,英文名: MCP-1/CCL2 ELISA Kit 原薯蓣皂苷(标准品) Protodioscin 质量规格:HPLC≥98%,标准品
小鼠巨嗜细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒 ,英文名: MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit 原苏木素B/原巴西苏木素(标准品) Protosappanin B 质量规格:HPLC≥98%,标准品
B834(DE3) 感受态细胞100ul*50操作方法:
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
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文献和实验相关,不同的载体是不一样的。一个载体可只看它的启动子到终止子那一段,其它的可以考虑少些。 pET 表达菌株的相关信息 ( DE3 )指宿主为 λ DE3 溶原菌,其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到 pET 载体的目标基因生产蛋白。命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶(为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物)的 pET 相容性质粒。带有 pLysS 的细胞
体转录体系,最终受T7噬菌体启动子控制的基因的转录能达到很高的水平。 T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶,因此T7 RNA聚合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调控方式。噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株,一段含有lacⅠ,lacUV5启动子和T7 RNA聚合酶基因的DNA片段倍插入其int基因中,用噬菌体DE3的溶源菌,如BL21(DE3)、HMS174(DE3)等作为表达载体的宿主菌,调控方式为化学信号诱导型,类似于Lac表达系统。 从开始涉及表达
酶表达基因的菌株中,在含有pLysS的pLysE宿主菌内重组质粒的本底表达被进一步抑制,质粒可以更稳定地存在。 Novagen提供多种表达使用的菌株,为了提高表达量做出了各种改造,它们大致分为以下几个种类: 蛋白酶缺陷型 所有B菌株的衍生株都是lon蛋白酶和ompT蛋白酶缺陷型的,这包括有B834,BL21,BLR,Origami™ B,Rosetta™和Tuner™。因此在纯化时可以保持蛋白的稳定不被降解。BL21(DE3)是应用最多的表达的表达菌株。另外它的衍生株BLR
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