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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
46
- 英文名:
XL2-Blue 感受态细胞
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ul*50
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
产品描述:
| 产品名称 | 包装 | 分类 |
| XL2-Blue 感受态细胞100ul*50 | 100ul*50 | 克隆感受态细胞 |
XL2-Blue 感受态细胞100ul*50操作方法:
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?
答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?
答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
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文献和实验一般指青霉属(Penicillium)。为分布很广的半知菌纲中的一属,和曲霉属有亲缘关系,有二百几十种,代表种是灰绿青霉( Penicillium glaucum),从土壤或空气中很易分离,分枝成帚状的分生孢子从菌丝体伸向空中,各顶端的小梗产生链状的青绿—褐色的分生孢子。根据分生孢子顶端的膨大与否,与曲霉属( AsPergillus)相区别。其语源来自其形状(帚状, Penicillus)。子囊壳为封闭型。该属菌产生一种特殊物质。自从弗莱明( A. Fleming, 1929)发现特异
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SECTIONS 4micron Paraffin wax sections SOLUTIONS Alcian Blue pH 3.1 Alcian Blue 1g 0.5% Acetic Acid 100ml Alcian Blue pH 2.5 Alcian Blue 1g
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