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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
26
- 英文名：
EPI300 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*50
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：EPI300 感受态细胞100ul*50
规格：100ul*50
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
EPI300 感受态细胞100ul*50注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
RTN4R Others Human 人 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酰辅酶A三锂盐Acetyl coenzyme A trilithium salt质量规格：95%,美国进口原装
人胰腺上皮细胞完全培养基 100mL尿素酶,脲酶(巨豆)Urease质量规格：>45 U/mg,进分
HT1080细胞，人成纤维肉瘤细胞 热带念珠菌 tTA基因修饰的小鼠畸胎瘤细胞(B类);F9-CAG-tTA-1A3蛋白酶VIIIProtease type VIII质量规格：美国原装进口7-15 units/mg,来源于地衣芽孢杆菌
CCL3 Protein Rat 重组大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白曲安奈德Triamcinolone Acetonide质量规格：>98%,BR
MDBK(牛肾细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphB2 / Hek5 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲安奈德(标准品)Triamcinolone Acetonide质量规格：>98%,标准品
PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 草酸依地普仑/草酸艾司西酞普兰（标准品）Escitalopram Oxalate质量规格：HPLC>98%,标准品
大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-1消旋卡多曲Racecadotril质量规格：>99.5%，EP6.2
BEL-7402细胞，肝癌细胞 人口腔表皮样癌细胞,KB细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2消旋卡多曲（标准品）Racecadotril质量规格：HPLC>98%,标准品
C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤细胞;RMA乙酰螺旋霉素Acetylspiramycin质量规格：>1200u/mg,CP2005
CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 尼罗替尼Nilotinib质量规格：>98.5%,BR
乙酰水杨酸 HPLC≥98% 20mg IGF蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
乙酰天麻素 HPLC≥98% 20mg IKB-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
乙酰缬草三酯 HPLC≥98% 20mg IKB-ALPHA蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
乙酰紫草素 HPLC≥98% 20mg IKB-α(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
乙酰紫堇灵 HPLC≥98% 20mg IL-1αELISA试剂盒鱼类白介素1α规格：96T/48T
乙氧基白屈菜红碱 HPLC≥95% 20mg IL-1βELISA试剂盒鱼类白介素1β规格：96T/48T
乙氧基血根碱 HPLC≥98% 20mg IL蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
异阿魏酸 HPLC≥98% 20mg IL蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
异补骨脂查尔酮 HPLC≥98% 20mg INSULI-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
S型 异补骨脂二氢黄酮 HPLC≥98% 20mg INSULI-ALPHA蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5
EPI300 感受态细胞100ul*50IGF蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 乙酰水杨酸 HPLC≥98% 20mg
IKB-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 乙酰天麻素 HPLC≥98% 20mg
IKB-ALPHA蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 乙酰缬草三酯 HPLC≥98% 20mg
IKB-α(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克 乙酰紫草素 HPLC≥98% 20mg
IL-1αELISA试剂盒鱼类白介素1α规格：96T/48T 乙酰紫堇灵 HPLC≥98% 20mg
IL-1βELISA试剂盒鱼类白介素1β规格：96T/48T 乙氧基白屈菜红碱 HPLC≥95% 20mg
IL蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 乙氧基血根碱 HPLC≥98% 20mg
IL蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 异阿魏酸 HPLC≥98% 20mg
INSULI-ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25 异补骨脂查尔酮 HPLC≥98% 20mg
INSULI-ALPHA蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5 S型 异补骨脂二氢黄酮 HPLC≥98% 20mg
EPI300 感受态细胞100ul*50操作说明：
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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