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- 百奥莱博
- SY0285-HIW
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
468
- 英文名：
Plus One Step Cloning Kit
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻融
- 规格：
25T|5×25T
特别提示：包括一步法快速克隆试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：一步法快速克隆试剂盒
英文名称：Plus One Step Cloning Kit
产品货号：SY0285
产品规格：25T|5×25T
本试剂盒是一款简单、快速、高效的DNA定向克隆产品，该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点，可高效克隆50 bp～10 kb片段。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15bp～25bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶的催化下，仅需反应15 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。
试剂盒中2×Enzyme Premix预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了独特的重组增强因子，可显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞 (107cfu/μg)也可实现高效克隆 (100cfu/ng Vector)，重组体系还兼容常规酶切、PCR反应体系。
产品用途：该试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。
产品组份：
2×Enzyme Premix————250μl
500 bp control insert(30ng/μl)————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50ng/μl)————5μl
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。
实验流程概览:
1）线性化克隆载体制备；
2）插入片段扩增引物设计；
3）插入片段PCR扩增；
4）进行重组反应；
5）反应产物转化、涂板；
6）克隆鉴定。
我公司销售的一步法快速克隆试剂盒北京厂家，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验1. 原理 RT—PCR 是一种将 cDNA 合成与 PCR 技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析, 还可以用来检测基因表达差异而不必构建 cDNA 文库克隆 cDNA。 RT-PCR 的模板可以为总 RNA 或 poly(A) 选择性 RNA 。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT) 或基因特异性的引物（GSP）起始。 在实际应用中，RT—PCR 又常常分为一步法 RT—PCR 和两步法 RT—PCR。 2. 特点 一步法
一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法：引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段，酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。需酶切，引物设计受酶切位点限制；需连入克隆载体；步骤多，耗时长；效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法：引物设计合成、PCR获得插入片段，PCR或酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。无需酶切，引物设计不受酶切位点限制；无需连入克隆载体；步骤少，速度快；高连接效率，高阳性克隆
OPD 时，可选用2mol / l的硫酸（H2SO4 ）作为终止液，比色时选用492nm 作为测定波长；使用TMB 时，可选用2 mol / l的盐酸或2 mol / l 的硫酸溶液作为终止液，比色时选用450 nm 作为测定波长。注:国内市场目前亦有HBsAg 检测的快速酶免疫试剂盒供应，该试剂盒系加有标本加速剂和酶标记抗体加速剂，可达到快速反应的目的，具体操作方法详见各生产厂家的试剂盒说明书。
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