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- 孚博生物提供Knockout (基因敲除)细胞系服务
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- 2025年07月15日
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- 提供商：
北京孚博
- 服务名称：
Knockout (基因敲除)细胞系服务
- 规格：
each
Knockout (基因敲除)细胞系服务
Knockout基因敲除细胞或动物模型一直以来是开展基因功能研究、寻找合适药物作用靶点的重要工具。CRISPR/Cas系统是细菌的一种适应性免疫机制，用来抵抗各种外来核酸的入侵。CRISPR/Cas9技术与ZFN、TALEN相比，更为高效、便捷，成为基因编辑的一个重要工具，在基因工程领域开创了新纪元。改造优化后的CRISPR/Cas9系统由两部分组成：sgRNA和Cas9蛋白。sgRNA特异性识别靶位点后，Cas9蛋白在靶位点附近进行切割，从而形成DSB。
孚博生物凭借先进的技术平台、专业的科研团队，将为您提供各种Knockout基因敲除细胞系服务，甚至是难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、神经元细胞等。我们的一站式服务包括：sgRNA设计、筛选高效的sgRNA、敲除载体构建、敲除效率验证等。我们将会在最短的时间内提供给您高质量的单克隆基因敲除细胞系，以及全面的检测报告，包括靶点设计，靶点基因敲除效率检测，克隆筛选及靶基因检测全部过程。
技术流程
靶点设计- 根据目的基因设计相应的靶位点，并构建sgRNA表达质粒。
效率检测- 通过Cruiser™ Enzyme酶切及pool细胞测序对设计的sgRNA进行靶点敲除效率检测。
细胞转染- 将cas9和sgRNA质粒转染目的细胞。
克隆筛选- 挑选单克隆细胞，检测细胞基因型。
敲除检测- Cruiser™ Enzyme酶切、TA克隆测序、qRT-PCR 、Western blot 等。
应用领域
研究基因的功能及表达调控机制。
构建各种基因突变导致的疾病模型如白化病、阿尔兹海默症、镰刀型细胞贫血症等，从而研究疾病的治疗及诊断方法。
染色体敲除或大片段敲除。
通过设计模版链和同源臂，插入外源基因或修复突变基因，从而进行转基因或突变基因修复实验。
利用Cas9的突变体（dCas9）只能特异性识别结合靶位点，而不能产生DSB的特点，可以进行基因表达调控的研究以及甲基化等表观遗传学研究。
技术优势
多样细胞种类- 在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、 V79、CHO、HepG2 等多个种属细胞中成功构建Knockout基因敲除细胞系。
一站式服务- 我们提供从sgRNA设计至敲除结果检测（DNA、mRNA、蛋白水平）的一站式服务，满足客户不同的需求。
各种基因位点- 敲除效率不受靶位点限制。
敲除效率高- 敲除效率达到高，且脱靶效率低，达到100%的准确率。
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文献和实验基因敲除--Gene Knockout Protocols Methods in Molecular Biology VOLUME158 Gene Knockout Protocols 基因敲除实验方法 M. J. Tymms and I. Kola Humana Press Inc. PDF格式，共437页，4.5M，点击此处下载 内容： 1 Overview Gene
上，成为重组载体。基因敲除是为了使某一基因失去其生理功能，所以一般设计为替换型载体。②．ES 细胞的获得：现在基因敲除一般采用是胚胎干细胞，最常用的是鼠，而兔，猪，鸡等的胚胎干细胞也有使用。常用的鼠的种系是１２９及其杂合体，因为这类小鼠具有自发突变形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的倾向，是基因敲除的理想实验动物。而其他遗传背景的胚胎干细胞系也逐渐被发展应用。[2，3]③．同源重组：将重组载体通过一定的方式(电穿孔法或显微注射)导入同源的胚胎干细胞(ES cell)中，使外源DNA 与胚胎干细胞基因组中相应部分
2 分析敲除位点（找到合适的敲除位置）怎么样才能通过尽量少的 sgNRA 数量，去敲除尽量多的 TP53 蛋白。既然是做 knockout，那一定是要所有的亚型都不能表达。那么既然如此，就是要敲除掉这些亚型共有的区域，而且越前面越好（如果只敲除尾巴，TP53 合成了半个身子，半个身子的 TP53 说不定也能起作用），另外，也不能敲除掉内含子（说是，如果敲掉了，可能会形成进的剪接，就有新的蛋白出现）----知识点好伐～1. 发现所有亚型共有区域2. 查看详细信息，得知第一个 segment（片段）是从
