检测实验丨鬼笔环肽（phalloidin ）染色

鬼笔环肽（phalloidin ）染色

鬼笔环肽能够选择性地与动植物体内的纤维状肌动蛋白（F-actin）结合，形成稳定的复合物。这种结合不会干扰细胞内应力纤维（即厚的微丝束）的正常功能。当鬼笔环肽以低浓度引入细胞质时，它会将聚合度较低的细胞质肌动蛋白和纤维蛋白吸收到稳定的肌动蛋白聚合物“岛”中，从而便于在显微镜下观察。

荧光标记的鬼笔环肽（如Phalloidin-TRITC或FITC标记鬼笔环肽）则通过其荧光特性，在特定波长光的激发下发出荧光，使得细胞内肌动蛋白丝的结构和分布清晰可见。

一、实验准备

实验器材：移液枪、涡旋混合器、正置荧光显微镜等。

实验试剂：鬼笔环肽染色液、PBS缓冲液、固定剂、封闭剂、DAPI染色液等。

二、实验步骤

1、细胞准备：在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3分钟。

2、固定：用固定液爬片15分钟，再用PBS浸洗玻片3次，每次3分钟。

3、染色：滴加稀释好的鬼笔环肽染液（如5μg/mL的Phalloidin-TRITC或FITC标记鬼笔环肽），37℃孵育1小时。之后用PBST清洗3次，每次3分钟。

4、染核：滴加DAPI避光孵育5分钟，对标本进行染核。然后用PBST清洗4次，每次5分钟，洗去多余的DAPI。

5、封片观察：用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片。最后在荧光显微镜下观察并采集图像。

三、注意事项

1、储存条件：鬼笔环肽及其荧光标记衍生物应储存在-20℃以下，保持干燥并避光。

2、细胞处理：在进行鬼笔环肽染色前，细胞应经过适当的固定和渗透处理，以确保染色效果。

3、荧光显微镜设置：根据所使用的荧光标记鬼笔环肽的激发和发射波长，调整荧光显微镜的设置以获得最佳的观察效果。