- 询价
- ATCC/DSMZ/CCTCC/promocell/ExPASy/JCRB/cellbiologics/KCLB/国家细胞资源中心/中科院等
- 国内外引进
- CQH073
- 2025年08月19日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
ECV304
- 库存：
999
- 组织来源：
人
- 物种来源：
人
- 细胞形态：
贴壁
- 运输方式：
干冰
- 生长状态：
上皮细胞样
- 规格：
株
货号 H073
种属 人
细胞来源 从ATCC/中科院/协和医院等地引进
生长特性 贴壁 上皮样
培养条件
培养基：80%M199+20%FBS
温度：37℃
气相：95%空气，5%二氧化碳
传代
1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；
2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6； 3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。
往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
保存
冻存条件：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO (备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)
保存条件：液氮存储
供应限制 经供研究之用
常见问题及解决方案
1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）
3.细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。
1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；
如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
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文献和实验我养的是膀胱癌 T24细胞（贴壁的）心得如下：1、 T24长的非常快，传代一般1：5传，每4天需要再传。2、虽然是永生化细胞，也一定不要等细胞100%汇合再传代，多次这样细胞状态不好，球形增加，还不容易洗掉。3、要用胰酶（0.25%）--EDTA（0.01%）混合消化液消化好些，一般1分钟内呈球形，即可混悬细胞了。4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。步骤：吸净培养液， PBS洗2次，加消化液室温一分钟左右，要在显微镜下注意观察，不要过头，球形后，吸掉消化液，加1毫升培养
我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。1、0.25%胰酶新鲜解冻,不需要预热。2、倒掉培养瓶中的培养基,并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。3、加入约1-2ml的胰酶,晃动瓶子,使液体浸润瓶底。4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟）5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）,见细胞变圆或细胞间隙变大,即可加入含血清的培养基终止消化。（我们的胰酶都不去掉）6、从瓶口到瓶底吹打，可见细胞
有着异曲同工之妙，不禁对科研工作者大开的脑洞甚为佩服。上面这些所谓「尿液验癌」颇有伪科学的意味，但也正打中了人们对于无创早检的向往。毕竟，没事儿让你抽血体检可能太费事，但谁会在乎一泡尿呢～尿液验癌的科学支撑「癌细胞」版尿液验癌由于肾脏强大的滤过功能，目前基于尿液的细胞学检查主要用于泌尿系统肿瘤的诊断，肾盂、膀胱和尿路上皮的癌细胞均能在尿液细胞学涂片中检出。 2019 年 7 月 25 日，复旦大学附属中山医院郭剑明团队、复旦大学上海医学院党永军团队以及美国乔治城大学刘学峰团队成功从膀胱癌患者尿液
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