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    抗体类结构确证

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    抗体类结构确证

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      • 服务名称:

        抗体类结构确证

      • 提供商:

        上海吉凯基因

      抗体类结构确证
      服务内容:

      高分辨率质谱的结构表征技术服务
      高分辨率质谱分析系统使开发与样品分析达到新高度。为蛋白质、药物代谢物和许多其他应用提供简便、高通量的定量工作流程。生物质谱可提供快速、易解的多组分的分析方法,且具有灵敏度高,选择性强,准确性好等特点,其适用范围远远超过放射性免疫检测和化学检测范围。主要可以用于结构表征、生物等效分析等。
      随着生物仿制药的兴起,高精度质谱分析被越来越多运用于生物结构确证中。药物研发过程中结构确证一项是药物设计与药物生产的关键点,也是帮助确立关键质量属性的重要手段。结构确证中质谱相关的主要是一级结构和高级结构,蛋白质的一级结构是氨基酸序列分析。蛋白质从头测序,现在有很多技术上的难关没有攻破,无法实现。目前阶段主要通过质谱分子量分析再结合肽谱图各方面结合后来确定序列的正确性。质谱分子量包含完整分子量、带糖和不带糖分子量及各亚基分子量分析。肽谱图包含肽段覆盖率、质谱法N端、质谱法C端等方式确定。高级结构质谱主要关注点是氨基酸上的各项修饰。比如糖谱、氨基酸修饰、二硫键分析和化合物分析。其中糖谱主要包含糖位点、糖基的链接方式、糖型。翻译后修饰主要包括氧化、脱酰胺、糖化等等,二硫键分析主要是针对半胱氨酸的配对情况。化合物就分为各种各样了,最典型的就是ADC,即单抗上链接了化合物,分析化合物的链接和化合物的结构。
      吉凯基因的高分辨率质谱Q Exactive,采用Orbitrap检测器,通过去卷积使得分子量测定变得容易实现,对蛋白质样品进行精确分子量测定,精度达到1Da左右,较传统的方式如SDS、分子筛之类提高了很多精度。可以满足蛋白质定性的需求,也可以满足分析蛋白的修饰,并可以对这些修饰情况进行定量分析。对蛋白质来说,尤其是一个成药的蛋白质药物,从头测序是必须的,也是法规要求的必检项。Edman降解法进行N端测序是常规检测项,但是很多重组蛋白由于各种各样的修饰无法进行Edman检测,从而使得质谱法的N端测序成为必备项。C端分析是从蛋白质的另一端分析其结构的完整性,但是目前也是没有什么特别好的原理或是仪器进行从头测序,质谱法C端分析成为了必须。C末端一般在蛋白质翻译后包装时会发生修饰,通常是异质体产生的来源之一。即使不影响生物活性,也是影响蛋白纯度的一个关键项。所以分析C端,是对工艺转移,工艺关键参数的确立是有帮助的。
      肽段覆盖率是确认序列正确与否的关键项。蛋白先经过酶解,经过反相色谱柱进行分离,经过MS/MS分析。通过二级质谱进行by离子匹配。吉凯基因使用的高分辨率质谱仪是ThermoQ Exactive质谱仪,其分辨率达到了14万,分析精度更是小于1ppmESI离子源,达到更佳灵敏度,对样品分析的准确度大大提高,假阳性率大大降低。
      项目 说明  
       
      分子量测定 总分子量:利用高分辨率LC-MS系统进行全扫描数据采集,再用BioPharma Finder软件去卷积得到单克隆抗体分子的完整分子量  
      重链和轻链分子量检测:用TCEP对单克隆抗体分子进行还原,使抗体分子重链和轻链解离,再经高分辨率LC-MS系统进行重链和轻链的分离与数据采集,最后用BioPharma Finder软件去卷积得到单克隆抗体重链和轻链的精确分子量  
      去糖基后分子量:用PNGaseF切除单克隆抗体中的N糖基化修饰,然后利用高分辨率LC-MS系统进行全扫描数据采集,再用BioPharma Finder软件去卷积得到单克隆抗体分子的去除N糖基化修饰后的精确分子量  
      氨基酸序列分析 肽谱图和覆盖率(单酶切):样品经蛋白酶解后,用LC-MS系统根据各肽段保留时间不同进行分离,通过UV检测器得到各肽段出峰情况,再通过质量检测器检测得到各肽段的质量和序列信息,然后用BioPharma Finder软件分析所得肽段序列占全序列的比率,即肽段覆盖率  
      肽谱图和覆盖率(多酶切):样品经蛋白酶解后,用LC-MS系统根据各肽段保留时间不同进行分离,通过UV检测器得到各肽段出峰情况,再通过质量检测器检测得到各肽段的质量和序列信息,然后用BioPharma Finder软件分析所得肽段序列占全序列的比率,即肽段覆盖率  
      N/C端序列分析:样品经蛋白酶解后,用LC-MS系统进行检测,然后用BioPharma Finder软件分析得到N/C端肽段序列及二级谱图,确证N端肽段  
      蛋白修饰检测 二硫键检测:对样品进行非还原蛋白酶解后,用LC-MS系统进行检测,然后用BioPharma Finder软件分析得到样品中的二硫键配对信息  
      N糖基化位点确证:利用PNGaseF在氧-18水中切除肽段上的N糖链,再经LC-MS系统进行检测,从而分析得到单克隆抗体分子中的N糖基化修饰位点  
      氨基酸修饰检测:对样品进行蛋白酶解后,用LC-MS系统进行检测,然后用BioPharma Finder软件分析得到样品中的修饰信息,并对其定量。  
      N糖谱分析:利用PNGaseF酶切以及2-AB标记N-糖苷,经LC-FLD-MS系统进行检测,从而分析得到单克隆抗体分子中的所有N-糖苷组成与含量信息。  






       

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    品牌商
    8 年  VIP 供应商

    上海吉凯基因化学技术有限公司

    • 联系人:

      陈先生

    • 所在地区:

      上海市浦东新区爱迪生路332号

    • 业务范围:

      技术服务,试剂

    • 经营模式:

      生产厂商,科研机构,代理商

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