SURE电击感受态细胞

特别提示：包括SURE电击感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SURE电击感受态细胞
英文名称：SURE Electroporation-Competent Cell
产品货号：MQ0027
产品规格：5×50μl/20×50μl

SURE电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。真核生物DNA存在较多“十字型”、“Z 字型”等二级或三级结构，这种DNA结构在利用传统大肠杆菌进行克隆时易被大肠杆菌体内的重组酶系统或其他防御系统识别并对其进行重组，删除等破坏，导致很难对这类DNA进行正确的克隆操作。SURE菌株可以解决这些问题：此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，并且(mcrA-，mcrCB-，mcrF-，mrr-，hsdR-)这些限制性突变的存在赋予此菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶(endA)突变、重组酶(recB recJ)突变，增强了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选；KanR，TetR赋予菌株卡那霉素和四环素抗性。
SURE电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>0.5×1010 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
E.coli B e14-(mcrA-)Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcCumuC::Tn5(Kanr)uvrC [F´ proABlacIqZΔM15 Tn10(Tetr)]
操作说明：
1.0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。
2.取-80℃保存的SURE电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。
A.测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；
B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3.用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。
4.启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作)，将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。
5.2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入1ml不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温)，用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等)，向离心管中补加S.O.C.培养基至10 ml。
倾斜45度放入摇床，37℃，225 rpm复苏60分钟。
6.5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。
注意事项：
1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
6.对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

除了SURE电击感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：


BTN130803 单细胞裂解液(DNA提取) 1mL
BTN160101 pUCm-T载体 1μg
BTN130204 Oligo快速复性液 1mL
BTN90207 大肠杆菌JM109感受态细胞 0.1mL*10
BTN130560 大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞 0.1mL*10
BTN140645 大肠杆菌TB1感受态细胞 10*100μl
BTN140431 大肠杆菌XL10-Gold化学感受态细胞 0.1mL*10
BTN140385 农杆菌LBA4404化学感受态细胞 10×100μL
YT415 TE Buffer 100ml
WE0253 BL21(DE3)感受态细胞 100μl×10支
ALH333 平末端克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术) 20次|80次
ALH338 无缝连接克隆试剂盒 10次
RFT108 2×ligation solution MasterMix 150μl
SY0023 pCMV/myc/mito 线粒体定位表达载体(哺乳动物细胞) 1μg
SY0282 零背景TOPO-TA克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点) 20T
SY0287 氨苄青霉素钠 10g
JN0102 Easy Digestion T载体(pED-T) 20次
JN0103 Easy Cloning T载体(pEC-T) 20次
JN0107 pBalbTrx-EK质粒 20次(1μg)
QN1055 鲑鱼精DNA(10mg/ml) 1ml
QN1062 pEGFP-N1 哺乳动物表达载体 20μl
CZ037 T4 DNA连接酶(2000U/μL) 10万U/50万U
MQ0011 Stbl2化学感受态细胞 10×100μl/50×100μl
MQ0030 DH10B电击感受态细胞 5×50μl/20×50μl
MQ0062 EHA101电击感受态细胞 10×50μl/50×50μl
MQ0065 AH109酵母感受态细胞 10×100μl/50×100μl
MQ0066 Y187酵母感受态细胞 10×100μl/50×100μl
MT0053 无缝连接试剂盒 10T|50T
GL1188 一步法感受态细菌制备试剂盒 100T
GL2285 DH5α受体菌 1ml