Sure感受态细胞

Sure感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: Sure感受态细胞
菌株类型: E.coli
产品目录号: 200238
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: Sure感受态细胞菌株基因型
抗性: 卡那，四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 克隆菌株
诱导方法: --
菌株特点:
SURE（Stop Unwanted Rearrangement Events）感受态细胞是设计用来克隆在传统菌株中无法克隆的DNA片段序列的菌株。SURE感受态菌株缺乏催化重组和删除非标准二级结构和三级结构， 例如十字形（由反向重复序列导致）和Z字形的DNA序列的组件。这些非标准二级结构和三级结构在真核细胞中经常出现，而且这些结构能够阻碍真核细胞DNA 在传统菌株中的克隆。sure感受态细胞是限制性内切酶阴性的(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-)，核酸内切酶（endA）缺陷，和重组酶(recB recJ)缺陷的。同时sure感受态细胞中所具有的F´ 游离基因上面的lacIqZΔM15基因，使得能够利用蓝白斑进行克隆筛选。

SURE感受态细胞主要是用来克隆不稳定DNA结构， 大肠杆菌DNA修复系统会针对重复序列、二级结构（如Z-DNA）等真核DNA进行重排或删除修饰。SURE感受态细胞针对uvrC,umuC,SbcC 和RecJ等参与修饰的大肠杆菌基因或蛋白进行突变，提高了真核来源、不规则DNA的稳定性达20倍以上，并且适合克隆甲基化DNA。

本身具有Kana和Tet抗性。当转化氯霉素抗性质粒到sure感受态细胞中时，一定要用100 ug/ml的氯霉素平板去筛选。因为sure感受态细胞在40ug/ul的氯霉素条件下具有抗性，而对于100ug/ul的氯霉素抗生素具有敏感性。

sure感受态细胞可以用于蓝白斑筛选，具有laz互补基因。

在载体构建过程中，我们经常会遇到一些基因片段具有高度的重复，这导致插入载体中的序列可能会在细菌扩增中不稳定，在质粒扩增中产生形成片段的缺失和重排，如发现插入片段高频率地产生缺失和重排，可以尝试使用重组缺陷大肠杆菌菌株，例如sure感受态细胞。
Sure感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
Sure感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，Sure感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。