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- Cmbio
- 上海
- CM-6016K
- 2025年08月31日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
零下80度
- 保质期：
1年
- 英文名：
SUREChemically Competent Cell
- 库存：
1000只
- 供应商：
上海淳麦
- 规格：
20*100ul
SURE感受态细胞
SURE Chemically Competent Cell
| SURE感受态细胞 | 20*100ul |
| pUC19（control vector） | 10pg/μl 10μl |
E. coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].
SURE感受态细胞简要说明：
真核生物DNA存在较多“十字型” 、“Z字型” 等二级或三级结构，这种DNA结构在利用传统大肠杆菌进行克隆时易被大肠杆菌体内的重组酶系统或其他防御系统识别并对其进行重组，删除等破坏，导致很难对这类DNA进行正确的克隆操作。CMbio SURE菌株可以解决这些问题：此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，并且(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-) 这些限制性突变的存在赋予此菌株无法对外源DNA进行标记、限制的能力，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶(endA)突变、重组酶 (recB recJ)突变，增强了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选；Kanr，Tetr赋予菌株卡那霉素和四环素抗性。SURE感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达5×108cfu/μg。
SURE感受态细胞操作说明：
- CMbio SURE感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
- 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
SURE感受态细胞注意事项：
- CMbio 感受态细胞最好在冰上融化。
- 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
- 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. CMbio 此菌株具有卡那霉素，四环素抗性，拥有这两种抗性的质粒无法使用；对 <40 µg/ml氯霉素有抗性，但对100 µg/ml氯霉素敏感用其他抗生素参考浓度：氨苄青霉素（终浓度： 100 µg/ml），氯霉素（终浓度：100 µg/ml）。
5. SURE感受态细胞采用常规转化方法，转化效率可达5×108cfu/μg。 ；如果有更高要求，可尝试Stratagene公司推荐的标准protocol。
上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。
上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面，实力雄厚，拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类，共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面，拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类，极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
一、材料与试剂 1. SOBor2xYT2. MES3. 足够80个管子的TFB（50 mL）/400转化DMSO4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。2. 加过夜培养的菌到500 ml 的SOB或2×YT，其装在4L瓶中以最大限度的透气。加入36 ml 5 M 的NaCl，在30℃下培养。3. 大约3 h，OD600达到0.5。4. 离心细胞。取沉淀，吸取
野生型 E.coli 并不容易转化，这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源 DNA 。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源 DNA 的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对 DNA 的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外 DNA 重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（ natural transformation
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