免疫荧光（双标）

免疫荧光实验步骤

1.石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h，脱蜡至水，用PBS洗三次，每次5 min。

2.切片置于EDTA缓冲液中微波修复，中火至沸后断电，间隔10min低火至沸。

3.自然冷却后PBS洗3次，每次5 min。

4.切片置于3%过氧化氢溶液中，室温下避光孵育10 min。

5.PBS洗3次，每次5 min，甩干后5% BSA封闭20 min。

6.去除BSA液，每张切片加入约50μl稀释的一抗（见附录1）覆盖组织，4℃过夜。

7.PBS洗3次，每次5 min。

8.去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗（见附录2），37℃孵育50min。

9.PBS洗3次，每次5min。

10.去除PBS液，每张切片加50-100μlDAPI染液，室温避光孵育5min。

11.染色后将切片放入PBS中洗3次，每次5min。

12.滴加适量的抗荧光淬灭剂于组织上，盖玻片封片，荧光显微镜下观察。