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上海代轩生物科技有限公司
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骨组织脱钙
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骨组织脱钙
骨组织(osseous tissue)是一种坚硬的结缔组织,与其他结缔组织基本相似,也是由细胞、纤维和基质构成的。但骨的最大特点是细胞基质具有大量的钙盐沉积,成为很坚硬的组织。由于骨组织里有钙盐,影响常规石蜡切片制作,因此骨组织及钙化病灶固定后,需先将钙盐除去使组织软化,才能进行常规切片。若脱钙不充分,则切片易碎裂,并损伤切片及刀刃,脱去钙盐的过程即脱钙。用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙 二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid EDTA)除此之外还有电解脱钙法。
一、注意事项
1、脱钙时间应根据所用的脱钙剂不同种类,不同骨组织、骨密质、骨松质和组织块的大小等具体情况来确定脱钙时间。
2、骨组织取材不宜过厚,一般应在5 mm左右,以免脱钙时间过长造成组织形态结构破坏和染色效果不佳。
3、脱钙容器不能使用金属制品,而且脱钙液的用量要充足,一般为标本的20-30倍,其中更换新液1-2次。
4、骨组织一般应先固定后脱钙,或脱钙固定同时进行,未经固定的骨组织不宜脱钙,且脱钙液也不宜加温。
脱钙液选择建议:
若骨组织后续要做免疫组化,建议选择EDTA脱钙液,脱钙速度相对长些;若骨组织后续仅做HE染色,则可选择甲酸方法脱钙,速度快,而且对组织结构影响极小。
二、操作说明
1、取材:样本如股骨头、牙齿、病变骨、碎骨组织等,针对不同的样本采用骨钳或骨锯将其锯成厚度不超过0.5 cm的骨片,剥去骨组织周围的软组织。
2、固定:将处理好的骨片放入固定液中固定12-24 h。
3、脱钙:样本固定好之后,将其放入脱钙液中脱钙一定时间,时间依据脱钙液和标本而定。
4、脱钙结束: 用细针轻刺可进入而不感到阻力,判定脱钙结束。脱钙后的组织经流水冲洗后,行常规石蜡切片。
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文献和实验不同的细胞,喜欢的环境是不一样的 有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞,譬如内皮细胞。而有一些细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。 巨噬细胞,生长速度非常快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。并且它比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长得连成一片,细胞形态就会差,老化的会比较多,对后期实验结果不好。 所以在养细胞的时候应该摸索该细胞
Triton-X100? 1、Triton X-100 化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚,是一种去污剂。在免疫组织化学(10 μm 以上厚切片) 和免疫细胞化学中一般用 Triton X-100 作为细胞通透剂,在膜上打孔。 2、其作用原理:Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内,故在细胞免疫组化时尤为推荐使用,这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。 3、Triton X-100 既是一种表面活性剂,也有抗氧化作用。 四
养了很久的细胞,有一些经验和体会总结一下,和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。 1.不同的细胞,喜欢的环境是不一样的。 这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。 有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆
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