油红O染色

一、组织冰冻切片实验步骤

1、取材：将动物处死后，低温环境下取出新鲜组织放入-80℃冰箱冷冻备用。

2、包埋：将冷冻的组织根据需要切成小块放于冰托上，用OTC包埋剂将组织完全覆盖，放入冰冻切片内冷冻。

3、切片：将冷冻好的组织以及冰托固定在冰冻切片机上，按照需求调整好厚度进行切片，一般切4-8μm。

4、固定：将切好的组织片用载玻片贴起，放入甲醛固定中固定30s-1min。固定后冷冻起备用。

二、油红O染色实验步骤

1、 切片复温：将切片取出，室温复温，复温后经蒸馏水洗三次，每次5min。

2、 染液配置：将油红O母液与蒸馏水按3:2比例混合，混合后静置10min，过滤后为工作液。

3、 浸洗：切片经蒸馏水洗后，入60%异丙醇浸洗。

4、 染色：将工作液滴加到组织上染色10min。

5、 分化：将切片入60%异丙醇分色，镜下控制时间，蒸馏水洗。

6、苏木素染细胞核：切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨*水返蓝，流水冲洗。

7、封片镜检：将切片上的水分甩干，用甘油明胶封片。封片后尽快镜检并拍照。