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- 免疫荧光单标双标实验服务
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- 2025年07月13日
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上海经科化学科技有限公司
- 服务名称：
免疫荧光单标双标实验服务
- 规格：
张
免疫荧光（双标）实验服务
免疫荧光（单标，芯片）实验服务
免疫荧光（双标，芯片）实验服务
免疫荧光（双标）实验服务
一、实验器材及试剂
1、 实验器材
2、 主要实验试剂
二、 石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2、 抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH9.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定）
3、 加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）
4、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
5、 DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
6、 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7、 镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
分子病理实验服务
IF/免疫荧光检测-IHC/免疫组化检测-Tunel检测-ISH/原位杂交检测-Confocal/共聚焦：
免疫荧光（单标）实验服务
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原位杂交白光实验服务
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激光共聚焦拍照实验服务
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“免疫学”、“动物实验”、“蛋白质相关”、
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文献和实验免疫荧光单标记和双标记的方法 1免疫荧光单标记方法 免疫 荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60％一70％的细胞。 (2)一抗、FITC或TRITC标记的二抗。 (3)4％多聚甲醛固定液或冷
对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察，或于 4℃ 保存 4h ，时间过长，可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照： （1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物； （2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物； （3）荧光标记物对照：PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是 donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti
免疫荧光实验步骤 脱蜡至水 二甲苯Ⅰ(8min) 二甲苯Ⅱ(8min) 无水乙醇和二甲苯1:1(5min) 无水乙醇(3min) 95%乙醇(3min) 85%乙醇(3min) 75%乙醇(3min) PBS洗3遍 二．抗原修复 柠檬酸钠抗原修复液修复。 抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。 三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。 四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧
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