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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
999
- 英文名:
Annexin V PE/7-AAD
- 保质期:
保存在2-8°C,避光保存,勿冰冻。有效期为1年。
- 供应商:
北京索莱宝科技有限公司
- 保存条件:
保存在2-8°C,避光保存,勿冰冻。有效期为1年。
- 规格:
20T/50T/100T
| 规格: | 20T | 产品价格: | ¥750.00 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥1720.00 |
| 规格: | 100T | 产品价格: | ¥3080.00 |
产品简介:
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此,可以采用 AnnexinV 与7-AAD 双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。
操作步骤:
标记的 Annexin V 可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸
1.用去离子水按 1:4 稀释结合缓冲液(4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水);
2.用 4℃预冷的 PBS 洗细胞两次,用 250ul 结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为 1× 106/ml;
3.取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/PE 和 10μl 7AAD 溶液;
4.混匀后于室温避光孵育 15 分钟;
5.在反应管中加 400μl PBS,流式细胞仪(FACS)分析
(注:消化细胞时不能用含 EDTA 的胰酶)
备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
答:您好,是可以的,例如转染 GFP 等带有绿色荧光信号的细胞样本等检测凋亡都是可以的,Annexin V-PE是橙红色荧光,流式检测建议使用FL2通道,7-AAD是红色荧光建议使用FL3通道检测,荧光通道是不冲突的,做好荧光补偿调节就行;凋亡和坏死的区分坏死细胞膜结构完整性被破坏,所以呈现出双阳性,而凋亡早期膜结构是完整的。
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文献和实验Q:Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么? A:Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合,将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,核染料 PI 或 7-AAD
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC












