柱式真菌RNAout

柱式真菌RNAout

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  • ¥1690
  • 钦诚生物
  • QC80804
  • 上海
  • 2025年07月12日
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      一年

    • 保存条件：

      4°保存

    • 规格：

      50次

      本产品本产品是在本公司真菌RNAout基础上改进的柱式产品，跟真菌RNAout 相比，它具有下列特点：
    1. 柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约 30 分钟。
    2. RNA 纯度高，OD260/280 一般都在 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、 Norther 杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
    3. RNA 产量高，一般在 20-70 ug/mL 酵母培养物(约 2.0 ×107 个细胞)。
    4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomycespombe 、Pichiapastoris、Bacillus
    subtilis、Staphylococcusaureus 等。
        成 分 编号 50 次包装  
    溶液A 80804A 20 mL
    溶液 B 80804B 25 mL
    溶液 C 80804C 75 mL
    溶液 D 80804D 25 mL
    离心吸附柱 60911 50 套
    通用洗柱液 60408 50 mL
    RNA 洗脱液 71207 10 mL
    使用手册 1 份
      常温运输，4℃保存，有效期一年。
       
     
    1. 将 50 mg 左右的干菌丝(或 100 mg 左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5 mL 塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10 mL 液体真菌在 1.5 mL 塑料离心管中 12000-15000 g 离心 1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
    2. 加入 0.4 mL 溶液 A 并充分吹打混匀。如果A 溶液存放时产生沉淀，请置于 65℃融化，用前充分摇晃均匀。
    3. 加入 0.4 mL 溶液 B，剧烈振荡 30 秒。
    4. 65℃保温 5 分钟。
    5. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟，转移上清到一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。
    6. 再加入 0.1 mL 溶液 B 和 0.1 mL 自备氯仿，振荡混匀 30 秒。
    7. 室温12000-15000 g 离心3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的5 mL 塑料离心管中。
     
    1. 加入相当于上清 3 倍体积的溶液 C（约 1.2-1.5 mL）和 1 倍体积的溶液 D（约 0.4-0.5 mL），充分混匀。
    2. 将混合 液（约 2.5mL ）分 3-4 次转移到离心吸附柱中。每次13000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
    3. 用 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
    4. 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用 0.5 mL 通用洗柱液重复此步一次。
    5. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA 的使用。
    6. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中，加入30-100 uL RNA 洗脱液。
    7. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于
    -80℃待用。
    1. RNA 完整性的电泳检测：
    如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28： 414 ， 2000 ）。如果是简单检测， 可以使用 TAE 或天泽基因的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液（BioTechniques，9:558，1990）。普通 DNA 上样液不含变性剂，也没经过去RNase 处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE 进行 RNA 电泳，因为 TBE 所含 是研究多糖的经典方法----络合法中的关键成分，通过与 RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA 分子内或 RNA 分子间的络合复 合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有 大的 RNA 络合复合物迟留在加样孔中（一般会误以为是基因组 DNA 污 染）。RNA 分子内或RNA 分子间的络合物的形成的多少和比例又与与 RNA 的数量比例有关，而RNA 样品中污染的其他多糖也会参与此反 应，对 RNA
    电泳的影响更复杂，所以 TBE 对 RNA 电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
    1. RNA 产量产率测定：
    将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40

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