- ¥690
- 钦诚生物
- QC80103
- 上海
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 保质期：
一年
- 供应商：
钦诚生物
- 保存条件：
4°保存
- 规格：
50次
| 产品及特点 | 本产品是细菌 RNAout 柱式升级产品，用于快速从各种常见的中提取总 RNA。跟细菌 RNAout 相比 它具有下列特点:
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| 规格及成分 | 成 份 | 编 号 | 大纸盒包装 | ||
| 柱式细菌 RNAout 溶液 A | 80103a | 25 mL | |||
| 柱式细菌 RNAout 溶液 B | 80103b | 25 mL | |||
| 溶菌酶干粉 | 80103c | 30 mg | |||
| 离心吸附柱 | 60911 | 50 套 | |||
| 通用洗柱液 | 60408 | 50 mL | |||
| RNA 洗脱液 | 71207 | 10 mL | |||
| 使用手册 | 80104sc | 1 份 | |||
| 运输及保存 | 常温运输，收到货后，溶液 A 长期保存需要放 4℃，溶菌酶干粉长期保存需要 放-20℃，有效期一年。 |
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| 自备试剂 | 氯仿。 | ||||
| 使用方法 | 注意：试验所用的实验室环境、耗材等均需要 RNase-free。操作步骤是针对在 1.5 mL 塑料离心管中进行的微量提取。
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- 吸尽液体培养基，如果是革氏阳性细菌，则加入 100uL 第 1 步制备的4mg/mL 的溶菌酶溶液，彻底重悬细菌，常温放置 5-10 分钟。如果是革氏阴性细菌，则加入 90uL TE 缓冲液和 10uL 第 1 步制备的 4mg/mL的溶菌酶溶液，彻底重悬细菌，常温放置 3-5 分钟。
- 加入 0.3mL 溶液 A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。此时裂解物总体积是 0.4mL。
- 加入约 0.2 倍体积的自备氯仿(10.4mL 裂解物需 0.1 mL 氯仿)，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
- 将上清液（约 0.3mL）转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。
- 加入等体积（约 0.3mL）的溶液 B，充分混匀后全部上柱。
- 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
- 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复此步一次。
- 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中，加入 30-100 uL RNA 洗脱液，室温放置两分钟。
- 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于
- RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子
- RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体
| 积)和产率(RNA 产量/组织用量)。 16. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则 分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。 |
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| 关联产品 | 非冻型细菌 RNA 保存液 |
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文献和实验2, 其它稳定剂和增强剂 三DNA提取相关产品 1.柱式小量质粒DNA抽提纯化试剂盒：MTL001-1 50次 79元 2.DNA胶回收试剂盒： MTL002-1 50次 89元 3.动物DNAout（动物DNA提取试剂盒）：3670-10 10 ml 90元 4.植物DNAout（植物DNA提取试剂盒）：3672-10 10次 90元 5.血液DNAout(血液DNA提取试剂盒)： 3671-10 10 次 90元 6.革氏阴性细菌DNAout提取试剂盒： 3673-10 10 次 90元
分培养的细胞可 以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆；而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌（特别是 革兰氏阳性菌）的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收。酵母和革兰氏阳性菌通常还需要液氮研磨过程中加入玻璃微珠帮助破壁， 酵母提取也可以加入诸如Lyticase等破壁酶帮助破壁，再用TRIpure或RNApure进行提取。4.选择最好的RNA分离方法现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法
1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。RNAfixer说明书下载. 3. 破壁方法 细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取 来说，是一个很关键的步骤，它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中，通过简单的涡旋震荡来匀浆;而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法，通常用液氮研磨。比如说细菌(特别是革兰氏阳性菌)的细胞壁，就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收
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