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- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
41
- 英文名：
OrigamiB(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10×100μL
1）OrigamiB(DE3) 感受态细胞10×100μL规格客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
以下是OrigamiB(DE3) 感受态细胞10×100μL规格的详细介绍点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
储存事项:
A. OrigamiB(DE3) 感受态细胞10×100μL规格在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. OrigamiB(DE3) 感受态细胞10×100μL规格组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤：
(1) OrigamiB(DE3) 感受态细胞10×100μL规格实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
n- 十二烷基 -β-D- 麦芽糖苷1g MQAE( 氯离子荧光探针 )20mg
脱氧胆酸5g Monobromobimane [mBBR]25mg
胆酸5g Monensin ( 蛋白转运抑制剂 )100mg
十二烷基磺酸100g MnCl2溶液，25mM，PCR 级5mL
去垢剂去除树脂10mL MM4-64(FM®4-64)1mg
非酶 RNA 清除剂
非酶 RNA 清除剂
柱式腐殖酸清除剂30 次 天净沙非同位素探针杂交试剂盒5次
柱式腐殖酸清除剂100 次 天净沙单细胞 RNA 扩增试剂盒80 次
非酶多糖清除剂 (DNA 专用 )50 次 天净沙 SPIA 扩增试剂盒 ( 用于扩增 DNA 模板 )20 次
天净沙核酸浓缩剂30mL 免质粒提取筛选试剂盒1000 次
柱式 RNA 纯化试剂盒50 次 免疫蛋白清除剂20 次
低载量 PCR 片段纯化试剂盒50 次 免 RNA 提取 RT-PCR 试剂盒 100 次
低载量 PCR 片段纯化试剂盒100 次 免 RNA 提取 FFPE RT-PCR 试剂盒30 次
高载量 PCR 片段纯化试剂盒50 次 免 DNA 提取 PCR 试剂盒100 次
北京棒杆菌 绳状青霉
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种Bacillusthuringiensissubsp.galleriae 宛氏拟青霉
木层孔菌 西伯利亚库特氏菌
具核梭杆菌多形亚种 蜜粘褶菌=革裥菌
乙型溶血性链球菌 赭曲霉
多头被孢 香港洛克氏菌
苏云金芽胞杆菌鲇泽变种Bacillusthuringienisvar.aisawai 运动发酵单孢菌
肺炎链球菌ATCC49619冻干粉 花生根瘤菌
吸水链霉菌紫色变种 干酪乳杆菌
发根根瘤菌 大肠埃希菌ATCC35218冻干粉
OrigamiB(DE3) 感受态细胞10×100μL规格黑化链霉菌 黑球漆菌 分解纤维素
生孢梭菌（产芽孢梭状芽孢杆菌） 类球红细菌(球形红杆菌)
南方树舌 许旺酵母
总状毛霉 掷抱酵母
苏云金芽胞杆菌巴基斯坦亚种Bacillusthuringiensissubsp.pakistani 宽鳞大孔菌
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文献和实验(3)TA克隆常见问题分析及其解决方案 附表 (4)如何检测感受态细胞的效率 ※ 为确定感受态细胞的转化效率，可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位/μg DNA，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率。 ※ 计算公式：转化效率＝产生菌落的总数/铺板DNA的总量。 例如，取1μl（0.1 ng/μl）完整的质粒转化100μl的感受态细胞。向转化反应液中加入900μl培养液，让细菌恢复一小段时间，取100μl铺板。培养过夜，产生1000
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
过夜（12h－14h）至对数生长期。 3.取三支灭菌试管，各加入5mL LB液体培养基(含氨苄），分别编号为1#，2#，3#，另外取装于500mL三角瓶中的150mL LB液体培养基（含氨苄），编号6#， 全部按1：50的比例接种。1# 接种100μL BL21(DE3)pET-32a，2# 接种100μL BL21(DE3)p32aGFPuv，3# 接种100μL BL21(DE3)p32aGFPuv，6# 接种3mL BL21(DE3)p32aGFPuv。
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