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- 2025年07月08日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
大提柱式真菌 RNAout
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
5次
服务流程：
1）大提柱式真菌 RNAout5次说明书客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. 大提柱式真菌 RNAout5次说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 大提柱式真菌 RNAout5次说明书组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
EcoR I-Not I-BamH I 接头1nmol 哺乳动物种属鉴定 PCR Mix100 次
Oligo 快速复性液，10×1mL 哺乳动物蛋白酶抑制剂1mL
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次 博莱霉素溶液 ,10mg/mL1mL
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒 ( 含转化液 )20 次 剥离硅烷50mL
酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次 玻璃珠法柱式真菌 DNAout50 次
粪便 DNAout30 次 一管式病毒 DNAout200 次
粪便 DNAout100 次 一管式 DNA 胶回收试剂盒30 次
柱式粪便 DNAout50 次 一管式 DNA 胶回收试剂盒100 次
凋亡 DNAout24 次 一步式细菌 DNAout50 次
柱式凋亡 DNAout50 次 一步式广谱 DNAout10mL
一步式 PAGE 染液10 次 GTP 溶液，2.5mM2mL
绿如蓝蛋白染液250 次 GTP 溶液，100mM0.25mL
超快蛋白银染试剂盒1000mL GST 固定试剂盒1套
可逆性铜染试剂盒1套 GSH( 抗氧化剂 )1g
可逆性锌染试剂盒1套 Golgi-Tracker Red( 高尔基体红色荧光探针 )1mg
采样产品系列 英文名称； 规格；
无菌水样采集袋 英文名称； 规格； 10只/袋*10/箱
无菌采样袋（45cm*55cm） 英文名称； Sterile Homogeneous Bag 规格； 50个/包
无菌采样袋/均质袋（32cm*20cm）（带压条） 英文名称； Sterile Homogeneous Bag 规格； 100个/包
无菌均质袋（不带压条） 英文名称； Sterile Homogeneous Bag 规格； 100个/包
万古霉素溶液 Vancomycin Solution 1mg*5支
VRBG琼脂 VRBG Agar 250g
西蒙氏枸橼酸盐培养基 Simmons Citrate Medium 250g
阪崎肠杆菌成套生化鉴定管 biochemical identification of sets of tubes 11种*2套/盒*5盒
氧化酶试纸 10片
大提柱式真菌 RNAout5次说明书巧克力琼脂平板（9cm） 用于嗜血杆菌、奈瑟氏菌分离培养用于嗜血杆菌、奈瑟氏菌分离培养
伊红美蓝琼脂平板（9cm） 弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是大肠杆菌
SS琼脂平板（9cm） 用于沙门氏菌、志贺氏菌的选择性分离培养用于沙门氏菌、志贺氏菌的选择性分离培养
HE琼脂平板（9cm） 用于沙门氏菌的选择性分离培养用于沙门氏菌的选择性分离培养
实验步骤：
(1) 大提柱式真菌 RNAout5次说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验等。 PCR 产物 两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连 T 载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连 T 载体。因为 PCR 产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个 bp，带形没啥变化。连 T 载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，再说 PCR 那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动
。总体来讲连TA克隆载体是很有优势的。 3，提质粒。建议用柱式提取或大提，保证质粒纯度。提取后测定浓度，核酸的实验配比都要精确定量。 4，酶切。用于连接的酶切很关键。需注意如下几点： ①如果是双酶切A和B，预实验中必须做A和B各自的单酶切和A+B的双酶切,好确认这几种酶都好用，质粒上的切点都好用。如果切不开就要考虑是不是酶的问题，buffer的问题，质粒上有没有这些切点，序列是否甲基化等。 ②酶切尽量用大体系，如50ul、100ul等。大体系能稀释内切酶包装中的甘油，对反应
。 3. 排除泵内气泡：逆时针旋开左边泵头的黑色旋扭2～3 圈，点击仪器控制界面“淋洗液阀 (Eluent Valve)”模块中的“开(on)”，约数秒后再把旋扭旋紧，等待数分钟后观察压力是否稳定;如压力波动较大，重复上述操作，直至压力稳定。 4. 在仪器控制界面上点击“开泵” ，等待系统平衡。 二、分析步骤： 1. 建立程序文件program file (可省略)，参考软件 说明书。 2. 建立方法文件method file (可省略)，参考
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