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- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase
- 保质期:
有效期2年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
100 U(10148ES60)/500 U(10148ES76)/1000 U(10148ES80)/40000 U(10148ES98)
| 规格: | 100 U(10148ES60) | 产品价格: | ¥198 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 500 U(10148ES76) | 产品价格: | ¥898 |
| 规格: | 1000 U(10148ES80) | 产品价格: | ¥1708 |
| 规格: | 40000 U(10148ES98) | 产品价格: | ¥127852 |
产品描述:
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增速度达到15 sec/kb,扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 10148ES10 (10U) | 10148ES60 (100U) | 10148ES76 (500U) | 10148ES80 (1,000U) |
|---|---|---|---|---|---|
| 10148-A | Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) | 5 μL | 50 μL | 250 μL | 250 μL×2 |
| 10148-B | 2×Canace® Gold PCR buffer(含Mg2+,dNTPs) | 300 μL | 1 mL×3 | 1 mL×15 | 1 mL×30 |
产品属性:
| 退火温度 | 68℃‑ |
| 保真度 | 52×‑ |
| GC范围 | 30%-70%‑ |
| 产品形式 | 单酶‑ |
| 应用 | 高保真PCR‑ |
| 延伸时间 | 30 sec/kb‑ |
| 末端结构 | 平末端‑ |
| 扩增长度 | 人gDNA/cDNA≤10kb;λDNA≤20kb‑ |
产品特色:
- 保真性高:Taq酶的52倍,Pfu酶的6倍。
- 特异性好:目的条带单一。
- 延伸速度快:可达15 sec/kb,极限速度1 sec/kb。
- 灵敏度高:可扩增低至1 pg模板。
- 适用性广:适合不同长度,不同GC含量模板的扩增。
应用案例:
- 高特异性:目的条带单一

图. 5种品牌的高保真DNA聚合酶扩增2 kb,4 kb的小鼠gDNA。Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶与同类产品对比,显示出更高的特异性和产量。Y:Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶;A-E:其他品牌的高保真DNA聚合酶;M:1kb DNA Marker。
- 延伸速度快:可达15 sec/kb,极限速度达1 sec/kb

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶分别扩增小鼠gDNA 2 kb和水稻gDNA 3 kb片段。不同延伸速度(1-60 sec/kb)都可有效扩增。M:1kb DNA Marker。
- 灵敏度高:可扩增低至1 pg模板

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶扩增质粒3 kb片段,不同模板量(1 pg-0.5 μg)都可有效扩增。NC:阴性对照。M:1kb DNA Marker。
- 适用于不同GC含量片段的扩增

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶对不同GC含量(30-70%)片段都可高效率的进行扩增。M:1kb DNA Marker。
- 适用于不同长度片段的扩增

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶对不同模板、不同长度(1-12 kb)片段都可高效率的进行扩增。M:1kb DNA Marker。模板:1-3:拟南芥gDNA,4-6:水稻gDNA,7-9:小鼠gDNA,10:人cDNA,11-18:人gDNA,19-21:质粒DNA,22:λDNA。
储存条件:
冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。
常见问题:
Q:Canace 具有保真性的原理是?错配率是多少?能保证不突变吗?
A: a)原理是具有 3’-5’的核酸外切酶活性,即有校正功能。 b)Taq 酶错配率:2*10-4,0.0002,大约5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约0.00039%,是 taq 酶的 52 倍。 c)高保真酶是突变概率低,但不是绝对的不突变。
Q:Canace 扩增后是平末端产物,如何加 A 尾?
A:仅供参考:先对平末端PCR 产物纯化后,浓度要求至少 20ng/ ul(跑胶图像条带清晰,明亮即可),取 14.5 ul PCR 产物,加入 2 ul Taq Buffer,3ul dNTP,0.5 ul Taq酶,在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加A 尾的DNA 片段。
Q:Canace 能否用于 XX 长度的片段?
A:验证范围内长度理论上是可以的(验证范围:简单模板 20kb,复杂模板 10kb)。但具体能否扩出,还与模板和引物等有关。
Q:产物突变?
A:原因 1:模板突变。 1.原始模板序列有突变。 原因:原始模板序列有突变会使扩增产物的突变位点恒定,表现在多个克隆测序发生突变,且突变位置恒定。 判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,测序结果与模板序列对比,发生突变且位置恒定,可认为是模板序列发生突变。
优化方法:更换序列正确的模板。
2.保存不当突变。
原因:反复冻融或长时间紫外照射可能导致模板发生断裂或突变,突变位置不定。
判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,测序结果与模板序列对比,发生突变且位置不定,可认为是因保存不当导致模板发生了突变。
优化方法:尽量减少模板的反复冻融或紫外照射。
原因 2:酶保真性差。
DNA 聚合酶保真性差,导致突变的概率大,在长片段扩增中更常见。
判断方法:将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序,模板不突变。以模板扩增得到的产物进行克隆测序后发生突变,且突变位置不恒定,可认为是 PCR 过程中发生的突变, 常是由于酶保真性差导致。
优化方法:更换成保真性更高的产品。注:保真性高低代表突变概率的高低,保真性再高的产品均不能完全避免突变。
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文献和实验Expand High Fidelity PCR--高保真PCR
Expand is a mixture of Taq and Pwo DNA polymerases (Boehringer). Pwo polymerase has 3' to 5' exo proofreading activity. If amplifying a 1 Kb fragment for 20 cycles, expect ~8% of the products
SuperScript III One-Step RT-PCR System with Platinum® Taq High Fidelity
. Because SuperScript™ III RT is not significantly inhibited by ribosomal and transfer RNA, it can be used to synthesize cDNA from total RNA. Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity is an enzyme mixture composed of recombinant Taq DNA polymerase
适合的酶的浓度,一些高保真没的效率要远远低于Taq polymerase,所以可能需要的酶的量也要大一些. 另外, 一般的 情况下, 变性的温度可以使用90~92度, 变性的时间也可以缩短,从而保证polymerase的活性d. template50ul PCR SYSTEM================================human gDNA 0.1ug-1ugE.Coli 10ng-100ngLamadaDNA 0.5ng-5ngPlasmid DNA 0.1ng-10ng
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