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- 2025年11月22日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
1st-Strand cDNA Synthesis Kit
- 库存：
950
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
cDNA第一链合成试剂盒产品及特点：
本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLVRT）高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。
1.使用突变的反转录酶，内源RNaseH活性低。
2.最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。
4.总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。
cDNA第一链合成试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法
一：合成PCR用的1st-strandcDNA
2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.再加入5uLRTBuffer（含标记dNTP，本试剂不提供）。
4.37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。
7.加1uL0.5MEDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。
cDNA第一链合成试剂盒相关产品：
本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLVRT）高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。
1.使用突变的反转录酶，内源RNaseH活性低。
2.最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。
4.总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。
cDNA第一链合成试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法
一：合成PCR用的1st-strandcDNA
2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.再加入5uLRTBuffer（含dNTP）。
4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GCRNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃5分钟。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。此步为RT反应。
7.70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。
cDNA第一链合成试剂盒二：合成建文库用的1st-strandcDNA3.再加入5uLRTBuffer（含dNTP）。
4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GCRNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃5分钟。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。此步为RT反应。
7.70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。
2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.再加入5uLRTBuffer（含dNTP）。
4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GCRNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃5分钟）。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。此步为RT反应。
7.70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。
cDNA第一链合成试剂盒三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟xuanya联系)
3.再加入5uLRTBuffer（含dNTP）。
4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GCRNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃5分钟）。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。此步为RT反应。
7.70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。
cDNA第一链合成试剂盒三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟xuanya联系)
2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.再加入5uLRTBuffer（含标记dNTP，本试剂不提供）。
4.37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。
7.加1uL0.5MEDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。
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