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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0334
- 2025年11月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Column Plasmid DNAOUT
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，最后洗去杂质，高效快速提取质粒DNA，全套操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5mL过夜培养的菌液纯化得到高达20ug的高纯度质粒DNA（OD260/OD280=1.8-2.0），可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。
1.快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2.不需要预平衡离心吸附柱。
3.洗柱液即开即用，不需要额外加乙醇。
4.纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD比值在1.8-2.0之间。
5.产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5ug/mL。
6.用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7.价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。
中提柱式BACDNAout运输及保存：
常温运输和保存，RNaseA溶液需要-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：无
中提柱式BACDNAout使用方法
1.先将全部RNaseA溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。
2.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12-16小时（摇床转速200-300）。
中提柱式BACDNAout注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA质量。另外，延长培养时间有利于提高质粒DNA浓度，但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
3.用1.5mL离心管收集1-4mL过夜培养饱和菌液，室温12,000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
4.加入250uL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。
中提柱式BACDNAout注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip吸头吹打沉淀至完全混匀。
5.加入250uL溶液B（如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。
6.加入350uL冰上预冷的溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
7.最高转速（12,000rpm以上）4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
8.静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
9.室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
10.加入500uL的通用洗柱液，室温12,000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
11.重复上步1次。
12.室温12,000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
13.将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管（自备）中，加入30-100uL65-80℃预热的DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
14.室温12,000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
15.由于xuanya的吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于第一次洗脱的20-30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
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文献和实验酶切，切完一个纯化后再切：温度要求不同，先酶切低温要求的，再酶切高温要求的；若盐浓度要求不同，先酶切低盐浓度要求的，再酶切高盐浓度要求的。5、 若质粒是在TE中保存的，TE 中的EDTA可能与酶的激活因子螯合，影响酶切效果，可放大酶切体积或重新浓缩质粒。6、 限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。7、 纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式，推荐柱式
6、 限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。 7、 纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式，推荐柱式，因为割胶手法不准，很容易割下大块的胶，影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物，既然如此，酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以，PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。
的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。7、纯化问题：纯化PCR产物割胶还是柱式，推荐柱式，因为割胶手法不准，很容易割下大块的胶，影响纯化效率。现在的柱式纯化号称可以祛除引物，既然如此，酶切掉的几个碱基肯定也会被纯化掉了。所以，PCR产物和双酶切产物的纯化均可应用柱式纯化。8、酶量的问题：以TAKARA的为例，其对1单位酶的定义如下：在50 μl 反应液中，30℃温度下反应1小时，将1 μg 的λDNA完全分解的酶量定义
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