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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0739
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
1st-Strand cDNA Synthesis Kit
- 库存：
950
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本试剂盒提供合成cDNA第一链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶（M-MuLVRT）高效合成mRNA的全长cDNA拷贝。
1.使用突变的反转录酶，内源RNaseH活性低。
2.最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA专一性引物三种引物（前两种本试剂盒提供）。
4.总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。
AMV cDNA第一链合成试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法
一：合成PCR用的1st-strandcDNA
3.再加入5uLRTBuffer（含dNTP）。
4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GCRNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃5分钟。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。此步为RT反应。
7.70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。
3.再加入5uLRTBuffer（含dNTP）。
4.37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GCRNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃5分钟）。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。此步为RT反应。
7.70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。
AMV cDNA第一链合成试剂盒三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟xuanya联系)
2.70℃保温5分钟后立即冰浴。
3.再加入5uLRTBuffer（含标记dNTP，本试剂不提供）。
4.37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5.加入2uLMMLV逆转录酶（含RI），反应终体积为20uL。
6.42℃保温60分钟（但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟）。
7.加1uL0.5MEDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段（如果使用随机引物，将出现多个小片段）。
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文献和实验M-MLV第一链cDNA合成试剂盒-技术手册一、 试剂盒组成 Components SK2027 SK2028 5×M-MLV Reaction Buffer 100µl
通过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后，变可进行cDNA第一链的合成，其步骤包括： 1）在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA 10μl（10μg），100m mol/L甲基氢氧化汞1μl，室温反应l0分钟，使RNA变性。 2)加100m mol/L的β-巯基乙醇2μl和10m mol/L RNA酶抑制剂2μl，室温放置5分钟。β-巯基乙醇有稳定逆转录酶活性的作用。 3)向上述反应混合物加lmg／ml
CDNA合成第一链试剂盒 #E6500L 150 个反应 7600 生工 SK2027 10次 MMLV第一链合成试剂盒 SK2028 20次 TAKARA D6135 5次 6800 Active Motif 50096 96rxns ReflectionTM 96
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