相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温避光
- 保质期:
12个月
- 英文名:
WB Stripping buffer (Alkaline)
- 库存:
100
- 供应商:
上海万生昊天生物技术有限公司
- 规格:
100ml/500ml
| 规格: | 100ml | 产品价格: | ¥90.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 500ml | 产品价格: | ¥270.0 |
Western抗体洗脱液(Stripping buffer)又称膜再生液或Western一抗二抗去除液,用于Western中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测GAPDH、β-actin等表达量相对稳定的管家蛋白或其它蛋白作为参照。Stripping buffer可以洗脱一抗二抗,非常方便地重新利用使用过的膜,检测其它蛋白。 Stripping buffer多次重复使用同一张膜,会导致蛋白信号的减弱不宜重复利用膜,一般可以利用2~3次。
Western Stripping buffer 主要依靠碱性来解除一抗二抗的结合,同时又不会导致转移到膜上的蛋白的损失, 适用于Western化学发光检测后的蛋白膜的重复利用(如ECL发光液),尤其适用于PVDF膜,其次为硝酸纤维素膜。用本试剂只需大约15-20分钟即可实现蛋白膜的重复使用,然后可以进行封闭等后续的Western操作.非化学发光试剂进行的Western检测(如DAB,NBT/BCIP)不适用于本试剂。
保存条件:室温避光保存,12月有效。
注意事项:
- 使用辣根过氧化物酶标记的抗体时,封闭液必须使用5%脱脂奶粉配制。使用碱性磷酸酯酶标记的抗体时,封闭液必须使用酪蛋白(casein)配制。
- Western Stripping buffer(碱性)特别适用于PVDF膜的再生,硝酸纤维素膜的再生效果不如PVDF膜。
- Western Stripping buffer(碱性)适用于ECL等类似的化学发光液的检测后的一抗二抗洗脱。非化学发光试剂进行的Western检测(如DAB,NBT/BCIP)不适用于本试剂。
- Western Stripping buffer(碱性)有轻微腐蚀性,使用时请注意防护。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
- 在膜完成Western化学发光检测后,蒸馏水中漂洗5min;
- 弃蒸馏水,加入抗体洗脱液,完全覆盖住膜;
- 摇床上漂洗5min;
- 弃液,尽量把抗体洗脱液去除干净,必要情况下,可以用滤纸吸干;
- 加入蒸馏水振荡漂洗2~3次,每次漂洗3~5min;
- 入封闭液进行封闭后(推荐酪氨酸或脱脂奶粉作为封闭液),进行Western后续操作。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验那么如何通过改变抗体稀释液的配方,寻求抗体孵育的最佳条件呢?首先要认清,抗体稀释液没有一个绝对通用的配方;一种抗体一个脾气。其次,抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体竞争抗原的强度,以及对其他区域的封闭强度两方面的平衡。目前,抗体稀释液中可以充当封闭蛋白的主要有milk,BSA和gelatin,似乎很少的样子 。。。可是,你有没有考虑过“复方”?--这下配方无限多了吧。1. 采用milk,BSA和gelatin的单方。3% milk,5% BSA,2.很多情况下单方的浓度很高了,背景问题仍不能
抗体孵育——WB真正的难点:抗体的使用是一种艺术,一种抗体一个脾气。对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。无论你如何提高自己的转膜技术,高效和低效之间往往只有数倍的差异,而抗体的效价可以差数千倍以上;同样,正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗,谋求特异性和非特异性背景之间差异的最大化。封闭最短可以缩减到5min:很多人把高背景或者黑板,认定为封闭不充分,其实这也是没有吃透WB(说实话,经常看到坛子上很多人这样给人答疑,非常的无语);实际上封闭(极端
Western Blot实验可以说是生物专业最基础的实验了,然而,虽然WB实验天天做,但是正常高清的结果图并不是你想有就能有。 WB 实验出现最多问题的,应该就是各种背景问题了。 你想一下,好不容易实验过五关斩六将做到最后一步,扫描结果出了,是这样的: 为什么明明跑出了想要的趋势,但就是背景脏?怎么让自己的条带不因脏脏的背景而毁了呢? 这里要清楚一点,背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的,有可能是以下的环节出了问题







