- ￥360 - 2100
- 万生昊天/WSHT
- 美国
- EZWB01-SEP
- 2025年12月31日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃避光
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Super ECL Plus Western Blotting Substrate
- 库存：
100
- 供应商：
上海万生昊天生物技术有限公司
- 规格：
2*50ml/2*100ml/2*500ml
| 规格： | 2*50ml | 产品价格： | ￥360.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 2*100ml | 产品价格： | ￥600.0 |
| 规格： | 2*500ml | 产品价格： | ￥2100.0 |
Super ECL Plus超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。
- 可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)，极其节省抗体；
- 简单易用：可替代其它公司的ECL发光底物，操作步骤无需进行特别优化；
- 灵敏度更高：可检测低皮克级的蛋白；
- 信号持续时间更长：光信号持续时间长达5小时；
- 更多成像方法：适用于X射线胶片、CCD或激光成像仪；
- 价格更经济：相比其他品牌的类似产品，不仅具有高品质和高性能，同时价格也更低。
用途：用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
保存条件：4℃密封避光保存一年以上。短期可放置室温。
使用说明：
- 执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。
操作概述：
注：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。
1) 将一抗浓度稀释到 0.05～1ug/ml
2) 将二抗浓度稀释到 0.005～0.04ug/mL
3) 将两种底物组份按 1:1 比例混合，制备底物工作液。
注：暴漏于日光或任何其他强光可能损害工作液，为获得最佳结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴漏于任何强光。短时间暴漏于实验室常规照明不会损害该工作液。
4) 将印迹膜在 ECL 底物工作液中孵育 5 分钟。
5) 吸出多余试剂。用清洁的塑料膜盖住该印迹膜。
6) 使印迹膜在 X 光胶片上曝光。
- Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液A和B，放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
- 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液（0.125mL发光工作液/cm2膜）中，与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
- 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
- 打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
- 暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
注意事项：
- A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，上述试剂相互污染后会导致 A液或B液逐渐失效，影响后续的使用效果。
- 步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
- 为获得最佳实验效果，应注意优化实验条件，包括实验检测样品的用量、一抗稀释度、二抗稀释度、杂交膜及封闭液的选择等。
- 当使用亲和素/生物素系统时，应避免使用含有脱脂奶粉的封闭液。
- 洗涤液、封闭液、抗体稀释液、ECL工作液应足量使用，确保印迹膜处于湿润状态。
- NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。
- 各溶液使用后，请盖紧瓶盖以防失效。
- 发光工作液孵育约3min后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。荧光持续时间很长，但开始反应后的30min内荧光更强一些，随后荧光会逐渐减弱，因此请注意充分利用这荧光较强的30min进行曝光或成像仪检测。
- 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
- 由于发光液极其灵敏，建议抗体起始浓度为一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
- 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
- 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
- A液和 B液均对人体有害，操作时请注意适当防护。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验到定量,近年来,由于检验技术的进步,可用极敏感的方法来定量原来在“正常范围”的CRP。可定量3毫克/升以下者被叫做高敏感性(高敏)CRP( high sensitive CRP, hsCRP)。 可定量1毫克/升以下的CRP(健康人的血清中不超过1毫克/升),被叫做超敏感(超敏)CRP(super sensitive CRP, ssCRP),从而发现了它的更重要的临床应用价值。 一、诊断各种急、慢性炎症。患者血清中CRP均会迅速升高,升高的幅度可达50~100倍。令人满意的是,它的升高程度与炎症
我最近两个月一直在做 ECL western，非常困难，都快做疯了。但是，功夫不负有心人，最终还是把困难的非特异条带和背景问题解决了。 经过此番，我总结了几条心得与大家分享： 第一条 不要用平底小盒或杂交袋，用可以旋转的杂交管（可以用 50 ml 塑料离心管做成），我刚刚得到了比较结果，效果大不一样。 第二条 膜在 blocking 前先用 stripping buffer 处理一下（当然也在杂交管中进行，注意要通过旋
过夜具体多长时间算合适，其实没有硬性规定； 二抗孵育的时间不宜过长，一般是室温下摇床孵育 1~2 小时，抗体孵育完成后要清洗干净，特别是二抗孵育完成后，否则可能导致显影结果出现高背景。 6、发光液配置 大部分实验室使用的 ECL 发光液，A 液和 B 液按照 1：1 的比例配置； 发光液要求现用现配，每次根据使用量合理配置用液量； 发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好，背景脏或者漆黑一片。
