- ¥2530
- 康朗生物
- KLM3086
- 上海
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
原代细胞
- 细胞类型：
见说明书
- 肿瘤类型：
见文献
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 库存：
5×105
- 生长状态：
良好
- 年限：
永久
- 运输方式：
新鲜/干冰
- 器官来源：
皮肤及软组织
- 是否是肿瘤细胞：
见文献
- 细胞形态：
正常
- 免疫类型：
见文献
- 物种来源：
大鼠
- 相关疾病：
见文献
- 组织来源：
皮肤及软组织
- 规格：
5×105
细胞简介：
真皮主要由成纤维细胞及其产生的纤维、基质构成，并有血管、淋巴管、神经、皮肤附属器及其他细胞成分。该细胞主要分布于黏膜和皮下疏松结缔组织，胞质内富含嗜碱性颗粒，细胞表面能够表达高亲和力FcεRI，可结合游离IgE，参与I型超敏反应。
本公司生产的小鼠真皮成纤维细胞采用酶解法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基信息：
我们推荐使用康朗生物研制的小鼠真皮成纤维细胞专用完全培养液（产品编号：KLM6086-5）作为体外培养小鼠真皮成纤维细胞的培养基。
细胞培养过程中，传代是非常重要的环节，若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害，原代细胞因其培养难度高且传代次数有限，细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。康朗生物根据其丰富的原代细胞培养经验，总结出一套细胞消化的方法，有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家：1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。
2. 提前准备好多聚赖氨酸（PLL，货号KL0403）或纤维粘连蛋白（BPF，货号KL8248）包被好的培养瓶。
3. 将完全培养基，胰酶/EDTA消化液（T/E，货号KL0103），胰胰中和液（TNS，货号KL0113）和不含钙镁离子的DPBS（货号KL0303）加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。
4. 用DPBS冲洗细胞。
5. 以T-75培养瓶为例，向培养瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。
6. 在消化期间，准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清（FBS，货号KL0500）。
7. 将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中（一小部分细胞已消化下来），将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟（此时培养瓶中没有液体）。
8. 在孵化结束时，轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。
9. 向培养瓶中加入5ml胰酶中和液，将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶，以保证所有细胞被收集。
10. 在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功，细胞数量应小于5%。
11. 以1000转/分离心收取的细胞悬液5分钟，然后在培养基中重悬细胞。
12. 细胞计数，然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。
原代细胞、细胞系与细胞株的区别
与细胞系相反，原代细胞是非常敏感的细胞，需要传统培养基之外的额外营养物质。为了优化原代细胞的存活和生长，需要针对每种细胞类型选择特定的培养基。例如，内皮细胞对营养的需求与上皮细胞或神经元有很大区别，因此需要特制的内皮细胞培养基。而传统的细胞培养基依靠血清提供生长因子、激素、脂质和其他的未知组分，以支持细胞的生长。但对于原代细胞，高血清水平可导致细胞分化，或促进污染细胞如成纤维细胞的生长。
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文献和实验正常 小鼠原代真皮纤维原细胞培养一、实验试剂1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S4、染色液： 0.4% Trypan Blue5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit6、检测试剂：抗小鼠Fibronectin
实验材料： 1. 正常动物皮肤 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2 3. 细胞培养瓶（T25） 4. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊 实验方法： 1. 取正常动物皮肤，置于小培养皿内，用PBS漂洗3-4次，以除去表面血污及毛发； 2. 将洗净的组织用眼科剪剪切成1mm3 左右大小，再用PBS漂洗3次; 3. 用眼科剪将组织块移至培养瓶瓶壁
准备：无菌手术器械，75%乙醇，0.25%胰酶，0.2% dispase酶，0.2% 胶原酶，胎鼠或初生小鼠步骤：1、将小鼠浸于75%乙醇中消毒5min；2、转移至超净工作台中，背部朝上固定四肢；3、用剪刀剪下背部皮肤（注意：不要剪到皮下肌肉组织）；4、刮除皮下多余组织（注意：不要刮得太厉害）；5、将皮肤剪成宽约3mm的条状，表皮朝上平铺于平皿中；6、加入0.2%的dispase（加入的量以使皮肤漂浮起为宜）；7、将上述皮肤组织于37℃中处理1.5-2h，或置于4℃冰箱中过夜；9、用镊子轻轻
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