小鼠食管平滑肌细胞提取物

小鼠食管平滑肌细胞提取物

脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，肌层，上1/3段为骨骼肌，下1/3为平滑肌，中段为骨骼肌和平滑肌混合组成。其肌纤维的排列为内环形和外纵形两层。食管还有括约肌，位于人环状软骨水平的,称为食管上括约肌;位于食管下端,一部分在膈上，穿过膈孔，另一部分在膈下的高压带，称为食管下括约肌。食管平滑肌瘤是起源于食管平滑肌的良性肿瘤，发生部位多见于食管中段，其次为下段，颈段罕见。临床上大多数病变发生在壁间，其余可在腔内，外膜下及少数呈弥漫型，使食管肌层呈广泛瘤样增生。

基因组DNA制备：采用酶解法裂解细胞，利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA，去除蛋白质、盐类、脂类等杂质，有效地保持基因组DNA的完整性。提取的DNA适用于酶切、PCR、Southern Blot等实验。
    总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。康朗生物提供的总RNA样品附有RNA样品OD值、浓度、总含量等。
    cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及2μg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的质控分析，保证了产品的质量。
    microRNA制备:采用具有超强的裂解能力和抽提灵敏度microRNA试剂盒制备，结合试剂盒采用的特殊吸附膜，大大增加了小分子RNA的吸附力，获得的microRNA纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。
    蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl,1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备细胞蛋白裂解液，离心去除细胞碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。
    细胞沉淀制备：首先分离培养出高质量的原代细胞，然后经平衡盐溶液清洗去除细胞表面杂质，最后用合适的裂解液裂解细胞并离心获得细胞沉淀。