多重染色服务

多重染色服务

与显色法多重免疫组化不同，多重荧光免疫组化（mIHC）是基于酪胺信号放大（ Tyramide Signal Amplification，TSA）技术，可实现在同一组织切片样本上对多个靶标进行区别标记，进而分析组织微环境中蕴含的复杂信息。

义翘神州提供的TSA法多重荧光免疫组化服务，有一系列屏蔽自发荧光干扰的手段，配合激光共聚焦显微镜的拍摄条件，提供更优质的图像质量，收获更特异的染色结果。

TSA法多重荧光免疫组化（Tyramide Signal Amplification, 酪胺信号放大技术）是一种高度灵敏的多重染色技术，它利用抗原-抗体反应对样本中的多种蛋白标志物进行荧光染色标记。这项技术能够在同一组织切片上实现多个靶标蛋白的同时标记，从而揭示组织微环境中的复杂信息。

TSA技术基于酪胺的信号放大原理，使用辣根过氧化物酶（HRP）催化荧光标记的酪胺分子，在H2O2环境下与抗原紧密结合部位沉积，实现信号放大。通过循环使用不同荧光染料，可在一张组织切片上实现多种蛋白的共染色。

TSA法多重荧光免疫组化为病理学、肿瘤学、神经科学等领域的研究提供了一种强有力的工具，有助于深入理解生物样本的复杂性。

 

在科学研究中的用途

• 定量分析：对蛋白表达水平进行定量分析。
• 细胞分型：识别和区分不同类型的细胞。
• 空间关系分析：研究不同蛋白在组织中的相对位置和相互作用。
• 肿瘤类型鉴定：通过同时检测多种与肿瘤相关的抗原进行肿瘤类型的鉴定。
• 发展期判断：分析肿瘤的发展阶段和分级。

 

都有哪些优势

• 高灵敏度：TSA技术能显著增强荧光放大信号，大约是普通荧光的3～10倍，使得检测更为敏感和准确。
• 灵活性：一抗抗体的种属来源不受限制，每一轮染色后可以将上一轮的一抗和二抗洗掉，不影响后续染色，提供实验设计上的灵活性。
• 稳定性：荧光素具有较高的稳定性，不易淬灭，染色后的玻片可以保存数月之久，方便后续重新扫描和分析。
• 操作简便：与传统的IHC、ICC、FISH等实验流程相似，仅需增加一个简单的孵育步骤即可实现多色标记信号。
• 节约成本：可以减少抗体或探针用量，提供更高的抗体稀释比例，降低非特异性结合。
• 高分辨率及低背景：检测试剂更高程度的稀释能够降低非特异性标记，提高分辨率。
• 兼容性高：与多种染料和检测系统兼容，可以进行多色标记以及共定位检测。

 

服务优势

 

多重染色服务类型

 

多重荧光免疫组化标记案例展示

• 多重荧光组化染色能为你带来什么？

多靶标组织原位的定位，半定量分析，数据更全面	大幅提升低丰度蛋白的检出几率	节省抗体用量，节约宝贵时间
高清 4 色共染图片，助力高水平文章发表	同一来源种属抗体的多重标记，无需更换经典克隆	节约珍贵样本，小切片提供大信息

 

• 多维度半定量分析

 

免疫组化酶双重染色案例展示

 

免疫荧光双重染色案例展示

 

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多重荧光免疫组化（mIF, Multiplex Immunofluorescence）是一种高级的组织学染色技术，它允许在同一组织切片中同时检测多个不同的抗原或蛋白质。

多重荧光免疫组化技术因其能够提供丰富的空间和分子层面的信息，在生物医学研究中具有重要的应用价值，特别是在细胞生物学、神经科学、肿瘤学和免疫学等领域。

 

实验原理：

• 多标记原理：使用不同的荧光标记（如荧光素、量子点、Cy染料等）与特异性的抗体结合。
• 抗原-抗体反应：利用抗原和抗体之间的特异性结合原理，抗体标记不同的荧光团，以识别和定位组织中的多个目标。
• 荧光显微镜检测：通过荧光显微镜观察，不同荧光标记的抗体发出不同颜色的光，从而实现多重检测。

 

常用于检测：

• 组织微环境中不同细胞类型的分布和相互作用。
• 同一细胞内多种蛋白质的共定位和表达模式。
• 疾病状态下组织结构和细胞组成的复杂变化。
• 药物作用机制研究，观察药物对组织和细胞的影响。

 

Tips：

• 抗体选择：选择针对不同抗原的高度特异性抗体。
• 荧光标记的选择：选择光谱分离良好、亮度高的荧光团，以避免光谱重叠。
• 组织切片的质量：保持组织结构的完整性和抗原的活性。
• 封闭和通透：使用封闭液减少非特异性结合，通透剂帮助抗体进入细胞。
• 抗体稀释和孵育：优化抗体稀释比例和孵育条件，提高染色特异性。
• 洗涤步骤：彻底清洗去除未结合的抗体，减少背景噪声。
• 多光谱成像：使用多光谱成像技术区分不同荧光标记。
• 图像分析：使用专门的图像分析软件对多重荧光信号进行定量分析。
• 避免交叉反应：确保不同荧光标记的抗体之间没有交叉反应。
• 实验设计：合理设计实验流程，包括对照组的设置，以验证结果的准确性。
• 荧光衰减：注意荧光标记可能随时间衰减，及时观察和记录结果。
• 数据解释：正确解释多重荧光免疫组化的结果，理解不同标记的生物学意义。

 

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