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- 酶联免疫吸附测定(ELISA)/酶联免疫斑点(ELISpot)检测服务
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- 2025年08月12日
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北京义翘神州科技股份有限公司
- 服务名称：
ELISA 检测服务
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酶联免疫吸附测定（Elisa）概论
酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。
酶联免疫斑点技术 (enzyme-linked immunospot assay, ELISpot) 是细胞免疫学研究中最敏感的检测方法之一，能够区分活化的T细胞亚群，可以在单细胞水平对抗体分泌细胞及细胞因子分泌细胞进行检测。在疫苗研究中，ELISpot是一种标准工具，用于通过测量激发强大T细胞反应的能力 (通常是干扰素-γ的分泌) 来确定疫苗的有效性。为满足客户的检测需求，义翘神州可提供ELISA检测服务和ELISpot检测服务。
义翘神州提供专业的ELISA实验检测服务，拥有6000多种优质ELISA应用抗体，500种ELISA检测试剂盒。
ELISA/ELISpot检测技术服务流程
ELISpot检测服务案例
在临床试验和候选疫苗中，细胞毒性T淋巴细胞（CTL）是发挥细胞免疫的一类重要细胞。而 IFN-γ 作为免疫活性细胞分泌的细胞因子在诱导抗病毒免疫中起着重要的免疫调理作用，因此 IFN-γ 的ELISpot是评价抗原特异性T细胞免疫的金标准。
ELISA/ELISpot检测相关内容
酶联免疫吸附测定（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISpot）检测是两种基于抗原-抗体反应的免疫学实验技术，它们在生物医学研究和诊断中有着广泛的应用。
ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）：
定义：ELISA是一种定性和半定量或定量检测方法，利用抗原-抗体反应的原理，通过酶标记的抗体来检测特定抗原或抗体的存在和量5758。
试验原理：
抗原或抗体被固定在固相载体（通常是96孔板）上。
加入特异性抗体，这些抗体会与固相载体上的抗原或抗体结合。
清洗去除未结合的抗体。
加入酶标记的二抗体，它与固相上的抗体结合。
再次清洗去除未结合的二抗体。
加入酶的底物，酶催化底物产生可检测的信号（如颜色变化或荧光）。
通过光度计测定吸光度或荧光强度，从而定量分析目标分子的浓度。
Tips：
- 需要特异性的抗体对。
- 可进行直接ELISA（抗原固定后直接使用酶标记的抗体检测）或间接ELISA（使用非标记的一抗后，再用酶标记的二抗检测）。
- 夹心ELISA可以同时使用两种特异性抗体夹住抗原。
- 竞争ELISA中，样本中的抗原与标记抗原竞争有限的抗体结合位点。
- 可用于高通量筛选和定量分析。
- 需要控制实验条件，如孵育时间和温度，以确保结果的准确性。
ELISpot（Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay）：
定义：ELISpot是一种高灵敏度的细胞免疫学检测技术，用于检测单个细胞分泌特定蛋白质（如细胞因子）的能力5051。
试验原理：
使用特异性捕获抗体预先包被固相载体（通常是PVDF膜的孔板）。
将细胞与刺激物一起孵育在包被的孔中，细胞在刺激下分泌特定蛋白质。
分泌的蛋白质被固相上的捕获抗体捕获，形成斑点。
清洗去除未结合的细胞和蛋白质。
加入生物素标记的检测抗体，与捕获的蛋白质结合。
加入链霉亲和素-酶偶联物，与生物素标记的抗体结合。
加入显色底物，酶催化底物产生不溶性色素，形成可见斑点。
斑点的数量和强度与分泌细胞的数量和活性成正比。
Tips：
- 可在单细胞水平上检测细胞因子的分泌。
- 高灵敏度和特异性，可以检测极少量的细胞因子。
- 斑点的数量代表分泌特定蛋白质的细胞数量。
- 可用于评估疫苗效果、细胞免疫反应、自身免疫疾病研究等。
- 实验操作需要严格控制，包括细胞培养条件、刺激物的选择、孵育时间等。
- 需要使用专门的读板仪和分析软件来计数和分析斑点。
这两种技术各有优势，ELISA适合于定量分析样本中的蛋白质浓度，而ELISpot更适合于评估细胞免疫反应和检测单个细胞的活性。
更多相关学习资源: ELISA开发方法介绍及常见问题解析
- 讲师介绍
王旭曼，毕业于暨南大学。在北京义翘神州科技股份有限公司主要负责ELISA检测及开发的相关工作，具有丰富的Elisa方法开发及Elisa试剂盒研发经验。
- 视频介绍
在本次讲座中将会结合多年ELISA实际操作经验，对ELISA实验中常见的一些问题，如无信号或信号低、样本读值、信号太强、边缘效应、重复性差、漂移等进行分析，以及如何避免出现这些问题。讲座还将会从样本特征、灵敏度要求、样本收集等多个角度讲一讲如何正确的选择ELISA试剂盒产品。
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文献和实验成正比。 目前 ELISA 法应用 1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 2、研究抗酶抗体的合成。 3、显现微量的免疫沉淀反应。 4、定量检测体液中抗原或抗体成份。 小优 ELISA 实验检测服务 优宁维公司提供空白板，buffer 缓冲液等 客户只需提供样本 小优结果形式：统计结果，实验流程，全程提供疑问解答 优宁维是专业的抗体公司，我们的实验服务团队是由博士后领衔的团队。我们实验室拥有先进的实验仪器平台，服务的价格是实惠亲民
ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书，可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期，保证所有试剂按说明书上的建议正确保存； 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象，如沉淀或变色等； 3. 底物溶液应为无色； 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液（样品、标准品及其他试剂）时，及时更换枪头，避免交叉污染； 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致； 6. 盒中试剂不能
作为 ELISA 的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%。 2. 样本的 OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X 轴上为标准品浓度，Y 轴为对应的 OD 值）。推荐使用 origin 软件。 详细步骤如下： 第一步: 输入 OD 值
