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    酵母单杂交  

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    酵母单杂交  

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      • 规格:

        询价

      酵母单杂交 文库构建&筛选 

      全场8.5折
      限时特惠Save 15%
      活动时间: 2019.4.1-5.31
      活动详情: 活动期间,金开瑞酵母单杂交服务(文库构建、筛选)全场8.5折,限时特惠,新春有礼!

      活动说明:
      1、此活动不与其他优惠活动同时享受;
      2、此活动最终解释权,归武汉金开瑞生物工程有限公司所有

      酵母单杂交文库构建及筛选:
      总RNA提取-mRNA分离纯化-双链cDNA合成及纯化-pBait-AbAi/His2质粒转化-cDNA文库构建-阳性克隆菌株鉴定-测序验证
      策略1:cDNA AD融合表达载体共转Y1HGold[pBait-AbAi]酵母感受态,经SD/-Leu/AbA缺陷培养基筛选出与诱饵序列相互作用的猎物蛋白。
      策略2:cDNA AD融合表达载体共转化Y187酵母株,pHis2-Bait重组质粒转化AH109酵母株,经SD/-Leu/-Trp/-His缺陷培养基筛选出与诱饵序列相互作用的猎物蛋白。

       
      酵母单杂交应用:
      1)确定已知DNA与蛋白间是否存在相互作用;
      2)鉴别DNA结合位点,发现潜在的结合蛋白基因;
      3)分析DNA结合结构域,准确定位与DNA结合的蛋白序列;


      多领域的研究利器
      • 植物:自交不亲和机理研究……
      • 病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选……
      • 信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选……
      • 癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选……
      • 寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选……
      • 基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育……

      独特的技术优势

      一站式辅助检测手段方便快捷,得到可靠的实验结论;

      多年文库构建经验,4种优化的Total RNA提取技术方案可以有效保证Total RNA的纯度和完整性,保证样本的多样性;

      文库质量保证措施
      RNA质量 总RNA提取方案-TRIZOL 适用细胞或者动物组织
      总RNA提取方案-CTAB 适用植物样本中RNA含量超低的样本
      总RNA提取方案-SDS 适用淀粉含量高的样本
      总RNA提取方案-试剂盒 适用多糖多酚含量高的样本

      高效的SM定向三框文库构建技术可以保证文库的阳性率在98%以上,且一份cDNA样本连接三个不同的读码框载体可以轻松实现三框文库的质控指标零差异,减少文库差异对筛选结果的影响;

      定向改造了pPR3-N系列载体为pPR3-GW载体,可以轻松实现核蛋白文库到膜蛋白文库的一步LR反应,获得膜蛋白酵母双杂交文库。


      文库构建策略比较
      实验步骤 三种文库构建策略比较
      Clontech的SMART技术 invitrogene技术 专利的SM定向三框文库技术
      双链cDNA的纯化方法 Spin400纯化柱子 invitrogene DNA分子筛纯化柱 改进的Spin1000纯化柱子,兼顾了片段长度的同时保证样本的回收率在80%左右,有效保证了文库的滴度
      双链cDNA与载体的连接 利用酵母体内同源重组酶完成同源重组 gateway方法 专利的SM定向三框文库构建策略在原始商业化载体pGADT7和pPR3-N系列载体的基础上改造了Sfi I和Smal I的酶切位点,用于零背景定向克隆目标cDNA片段。
      文库的交付形式 转化到酵母细胞的文库菌 转化到大肠杆菌的文库菌和文库质粒 转化到大肠杆菌的文库菌和文库质粒
      文库的用途 改变筛选方案之后可以实现文库的多用途 可以方便的通过一步LR反应实现文库的多用途 可以通过简单的载体改造构建到任意想要的载体上
      文库的阳性率 90%左右 90%左右 98%以上
      文库的插入片段 800bp以上 1000bp左右 1200bp左右的集中分布


      服务流程


       

      酵母单杂交

      服务项目 客户提供 最终交付
      文库构建 组织/细胞 滴度在1×108以上的酵母文库菌液;
      文库PCR鉴定结果图片(阳性率在80%左右)
      文库筛选 promoter基因序列/质粒 筛选过程中的全部原始图片;
      筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果

      针对酵母单杂交实验结果,可作进一步验证:

      服务项目 实验目的 细分 周期(工作日)
      EMSA 验证启动子和蛋白互作 探针合成及标记 10
      EMSA实验 20
      双萤光素梅检测 验证启动子和蛋白互作 载体构建 10-15
      双萤光素酶检测 25

      注:
      1. 双萤光素酶检测默认使用293T细胞,使用其他细胞视培养及转染难度议价;

      2. 双萤光素酶检测启动子-转录因子验证默认1个转录因子 + 启动子序列WT和Mut各1个;microRNA靶基因验证默认1个microRNA + 靶序列WT和Mut各1个,超过以上组合数量请询价。



       金开瑞-功能蛋白质组学一站式服务商:

      武汉金开瑞生物工程有限公司位于武汉国家生物产业基地,是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。六大核心技术平台、专业技术团队,最大程度保证您的项目按时保质的实施。
      蛋白质组分析平台——iTRAQ、SWATH、SILAC、Label-free、修饰蛋白质组,涵盖各种特殊样本(线粒体、膜蛋白、石蜡包埋等);
      检测分析平台——免疫学、细胞系、分子生物学检测、双荧光素酶报告基因;
      基因服务平台——引物合成、基因合成、DNA提取、载体构建、定点突变;
      病毒包装平台——慢病毒、腺病毒、腺相关病毒包装、稳转细胞株构建;
      蛋白表达平台——提供从基因合成到蛋白表达的一站式服务;
      抗体定制平台——单/多克隆抗体、人源化抗体、基因工程抗体、双特异性抗体、修饰抗体、诊断抗体、小分子抗体、抗体对、噬菌体服务。
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      咨询电话:027-62431110
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    武汉金开瑞生物工程有限公司

    • 联系人:

      王经理

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      武汉市东湖高新区高新大道666号

    • 业务范围:

      试剂,细胞库 / 细胞培养,技术服务

    • 经营模式:

      生产厂商

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