SPR/BLI分子互作检测服务

亲和力是评价可逆反应过程中两个分子间相互作用强弱的特征参数，是了解分子以及识别生物学过程、药物的发现与筛选等的重要指标。蛋白质相互作用/亲和力检测可应用于药物早期研究开发、筛选鉴定、临床前与临床研究以及下游生产质控等各个环节，而且在生命科学基础研究、生物制药开发等领域也有广泛应用。目前业内常用的检测技术有表面等离子共振（Surface plasmon resonance, SPR）和生物膜干涉技术（Bio-Layer Interferometry, BLI）。

义翘神州拥有丰富和高质量的蛋白资源，如Fc受体蛋白、免疫检查点蛋白、生物素标记蛋白等，可提供利用BLI技术（Octet仪器）和SPR技术（Biacore仪器）为客户提供高质量一体化的分子互作检测服务，包括抗体筛选、活性检测、表位作图、一致性评价和质量控制检测服务。

Biacore/Octet亲和力检测服务范围

SPR/BLI亲和力检测平台
义翘神州基于Biacore平台与ForteBio Octet 平台为客户提供快速准确的亲和力测定服务，与其他互作分析技术相比，如ELISA、免疫共沉淀、酵母双杂交，有着实时、无标记、可检测低亲和的显著优势，能够实现对分子间亲和力的准确检测。

 

 

 

 

我们的优势与能力

 

丰富的蛋白产品支持（FcRn，FcγR， 靶点蛋白等）
义翘神州拥有丰富的蛋白资源，全面覆盖Fc受体蛋白、免疫检查点蛋白、细胞因子、蛋白酶和SARS-CoV-2病毒蛋白等，为您提供高质量一体化的分子互作检测服务。

 

服务内容

服务类型	服务内容	周期	交付
• 生物大分子间相互作用 • 抗体与Fc受体蛋白/补体亲和力测定 • 抗体筛选、表征、一致性评价 • 小分子亲和力检测	• 方法开发与优化 • 正式分析与检测	• 1-3周	• 检测报告

客户提供
1. 样品类型、浓度、分子量、种属、标签等信息
2. • SPR：1）分析物样品中不含有甘油、蔗糖、咪唑等高折光的成分；2）氨基偶联的配体溶液中不含有tris、NaN3、甘氨酸等成分；3）小分子需要明确有机溶剂信息
    • BLI： 1）分析物样品中不含有高浓度的高聚物物质，如PEG等；2）氨基偶联的配体溶液中不含有tris、NaN3、甘氨酸等成分

案例分享
义翘神州拥有7000+优质的靶点蛋白，如Fc受体蛋白、免疫检查点蛋白、生物素标记蛋白等，检测中心获得CNAS资质，可提供抗体筛选、表征和Fc受体检测等，助力抗体药IND申报。

抗体与Fc受体蛋白亲和力测定

• Fc受体蛋白与抗体亲和力测定（BLI）

抗体与补体亲和力测定

• 抗体与补体亲和力测定（BLI）

人抗体IgG1与补体C1q结合，亲和力测定结果为2.58×10-8 M（BLI）。

生物大分子间相互作用

• 生物大分子间相互作用（SPR/BLI）

一致性评价

• 一致性评价（SPR）

 

Sample	Similarity Score (%)
Drug D	100
Biosimilar	81.86

抗体筛选

• 抗体筛选（SPR）

 

配体	分析物	KD(M)	亲和力排序
127	RBD	1.61E-13	1
131	RBD	4.97E-10	3
141	RBD	2.87E-10	2

以下Biacore实验，筛选针对靶标2019-nCoV Spike RBD的3个细胞上清，目的是得到可高表达、与靶标高亲和抗体的细胞株，从以下筛选数据判断，127号细胞株符合要求。

 

SPR/BLI亲和力测定服务常见问题解答

• SPR与BLI之间有哪些差异以及各自的优点、缺点是什么？

抗原与抗体的亲和力测定在药物的发现与筛选、药效评价等阶段是一项重要工作。亲和力是评价可逆反应过程中两个分子间相互作用强弱的特征参数，是了解分子以及识别生物学过程、药物的发现与筛选等的重要指标。
SPR和BLI技术作为表征生物分子相互作用动力学的两种技术，一直占据主导地位。SPR和BLI在亲和力检测中各具优势，其均可以获得亲和力准确数值以及相应的动力学数据，SPR 具有比BLI 更长的历史，具有更高的灵敏度，在分辨方面更胜一筹；但SPR所需仪器维护较多，实验结束后的样品不可回收。BLI可以提供更高的通量和更短实验周期，但温度控制范围有限且实验过程中面临样品蒸发的挑战。更多内容详见下表。
如果您有兴趣使用义翘神州SPR/BLI分子互作服务来支持您的研究发现，您可以通过以下方式进行咨询。

Technologies	Surface Plasmon Resonance (SPR)	Biolayer Interferometry (BLI)
Signal readout	Refractive Index	Wavelength Shift
Affinity	Yes	Yes
Kinetics	Yes	Yes
Thermodynamics	Yes	Limited
Throughput	Medium	High
Sample analysis time	Long	Short
Sample recovery	No	Yes
Affinity Range	10−3–10−14	10−3–10−12
Advantages	• Higher sample information  • More flexible operations • Higher sensitivity	• Higher throughput • Lower biosensors cost • Lower sample buffer restrictions
Disadvantages	Higher sample buffer restrictions Higher biosensor cost	No thermodynamic parameters

 

• Biacore检测过程中，如果为病毒样本，仪器需要消毒吗？如何做清洗？

每次检测完病毒样本后均需要对仪器至少进行Desorb清洗，除去管路中残留的样品，最好同时进行sanitize清洗除菌，防止管路中微生物生长阻塞管路对仪器造成损坏。

 

• 亲和力分析一般选择哪种缓冲液？对蛋白缓冲液有什么要求？

亲和力分析常用的缓冲液为PBS或者HBS；使用NTA传感器时缓冲液中不得含有EDTA；使用AR2G /CM5传感器时配体蛋白缓冲液中不得含有其他氨基物质，如tris；使用APS 传感器时缓冲液中不得含有任何去污剂。

 

• 小分子化合物可以做亲和力检测吗？如果进行亲和力检测，需要用DMSO溶解吗？

小分子化合物可以做亲和力检测，需不需要使用DMSO溶解，取决于小分子本身的溶解性质。如果需要DMSO才能溶解，那么在SPR亲和力分析时需要进行溶剂校正。

义翘神州同时拥有两种平台（SPR和BLI），可提供包括蛋白、抗体、DNA/RNA、脂类、多糖、多肽、小分子化合物、病毒、细胞、细菌、纳米材料等多样品类型的高通量亲和力检测。根据客户检测需求，可选择单一平台或两种平台进行活性验证，助力您完成研发项目。

 

• 稳态分析一般亲和力会相对较弱吗？

稳态分析只是一种拟合方式，适用于快结合快解离的结合方式，与亲和力大小无关。无论是快结合快解离，还是慢结合慢解离，只是不同的动力学方式，有可能具有相同的亲和力。

 

• 使用BLI技术测定亲和力过程中出现非特异性结合时，要如何解决呢？

非特异性结合是亲和力检测过程中经常遇到的问题。使用BLI技术（Octet设备）测定亲和力出现非特异性结合时，解决方法为：
1）除添加牛血清白蛋白（BSA）外，建议在分析物缓冲液中加入0.02% Tween-20， 以去除疏水作用所导致的非特异性吸附；
2) 将具有非特异性的物质固化在传感器上；
3) 适当降低分析物的浓度；
4) 更换传感器，比如从SA传感器或者Capture类的传感器变成APS传感器或者 SSA 传感器。
5) 更换或调整缓冲液。

 

• 使用SPR技术测定亲和力过程中出现非特异性结合时，要如何解决呢？

使用SPR技术（Biacore设备）测定亲和力出现非特异性结合时，不同情况及解决方法如下：
1） 与参比通道的非特异性结合---向分析物溶液中添加可溶性的葡聚糖，以竞争性抑制与传感芯片表面上葡聚糖的非特异性结合。
2） 与配体分子的非特异性结合---该种非特异不在参比通道上产生响应值，但通常表现为与配体通道的非饱和结合。若混合样品中含有如细胞裂解物或血清中的非分析物组分，则也可能与配体结合，尽量减少这类结合的一般原则是在样品和运行缓冲液中使用生理水平或更高的离子强度，而且如果表面活性剂不影响亲和力分析，则应添加表面活性剂，如果上述措施没有效果，则应更换其它配体。
有时分析物会无选择地结合到配体上（例如，许多低分子量化合物以低亲和力结合到血清白蛋白上的多个位点，在表现上类似于非特异性结合），在该情况下，从相对低浓度的分析物样品的传感图中有可能获得关于高亲和力结合位点的有用信息，因为低浓度时样品中低亲和力结合并不显著，调整缓冲条件有助于降低无选择性结合的影响。

 

• 如何使用Biacore检测细胞或者病毒样本（例如潜在的大颗粒样本）？

以检测细胞样品为例：
细胞首先需要样品前处理：①离心后弃上清；②加入PBS重复清洗3次样品，细胞滤网过滤掉聚集的细胞，③加入醋酸钠，将过滤后的细胞调整稀释至合适的细胞密度，如：4E4 cell/mL。

 

• 如何使用Biacore仪器进行表位分析？

利用Biacore的抗原表位作图方法进行分析，有两种方法。
第一种方法为配对检测，在芯片表面固定一种抗体，将抗原结合到抗体上；然后流经第二种抗体时，检测是否能够同时结合到抗原上；
第二种方法为基于肽段抑制检测的抗原表位作图，某一抗原结构表位的肽段将直接抑制抗体与抗原上该表位的结合。

 

• 如何对带有同样融合标签的两个蛋白做亲和力分析？

可以通过氨基偶联直接固化其中一个蛋白，另外一个蛋白作为分析物进行检测。也可以使用捕获法，在固化完成后，使用带有相同标签的无关蛋白完全封闭传感器。需要注意的是，封闭步骤要达到饱和，而且封闭需牢固，即封闭完成后的基线达到平稳状态。在满足封闭完全和稳定的情况下，就可以进行分析物的结合和解离。

 

SPR/BLI分子互作检测服务讲座资源

 

 

 

• 讲座介绍

免疫学检测技术的用途非常广泛，不仅用于相关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究，还用于生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检测，免疫学检测技术不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学、生物学许多领域的联系。亲和力是判定分子间相互作用的重要参数。它可以帮助我们了解生物学过程和分子识别过程，例如：驱动药物先导物的发现，并帮助我们选择生物药物，优化药物的安全性和药效，以及药物剂型和制造工艺。

若想分析分子间相互作用，我们须全面了解：分子间是否存在结合，结合的快慢、强弱，结合的机理、以及驱动力……所有这些关于分子间相互作用的研究常常采用生物物理的方法来进行，很多技术都需要提前对作用的分子进行标记处理，但标记的处理常常会导致分子不是处于真正的原位环境，而且标记的处理会带来其他无法预测的额外因素，为分子间相互作用的研究增加了难度。无须标记、实时表征结合过程的亲和力测定方法为分子间相互作用的研究提供了便捷。

本次讲座对免疫学检测方法进行简单介绍，重点介绍分子间亲和力测定，针对目前主流的表面等离子共振技术（SPR）、生物膜层干涉技术（BLI）等动力学测定亲和力的方法，以及Elisa亲和力测定的饱和浓度法进行一一介绍。

 

• 讲座嘉宾介绍

王旭曼  免疫检测技术负责人
北京义翘神州科技股份有限公司
王旭曼，义翘神州免疫检测技术负责人，在北京义翘神州科技股份有限公司主要负责ELISA、SPR及BLI分子相互作用分析，WB、FCM、IHC、IF等平台的建设工作，具有丰富的免疫学检测经验。

 

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