PC102 RIPA 裂解液(中强度)

PC102 RIPA 裂解液(中强度)

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  • PC102
  • 2025年12月04日
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      100mL

    RIPA裂解液
    RIPA Lysis Buffer
    本产品常温运输;保存于4保质期12个月。

    货号规格
    goodPC101     RIPA 裂解液(高强度)goood100 mL
    goodPC102     RIPA 裂解液(中强度)goood100 mL
    goodPC103     RIPA 裂解液(弱强度)goood100 mL
    goodPC104     RIPA 裂解液(强中弱套装)go50 mL×3

    产品简介
    goodRIPA裂解液(RIPA的本意Radio Immunoprecipitation Assay)是一种传统的细胞组织快速裂解液,主要用于从动物细胞和组织取可溶性蛋白,裂解得到的蛋白样品可以用于常规Western BlotIPElisa等实验。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以使 BCA蛋白定量试剂 (货号ZJ101或ZJ102)测定蛋白浓度。

    使用说明
    good1. 取适当量的裂解液(1×106细胞需要50~100 µL每20 mg组织样本需要约150~250 μL),在使用前数分钟内 蛋白酶抑制剂 1:100(V/V)加入其( 蛋白酶抑制剂 需另行购买,货号:GRF101);
    good注意:如所需提取的为磷酸化蛋白,还需RIPA裂解液中1:100(V/V)加 磷酸酶抑制剂 (货号:GRF102)。 
    good2. 样本裂解(需在冰上操作):
               ◈  对于贴壁细胞
    (1) 弃去培养基,用1×PBS(货号PS110,或生理盐水、无血清培养液)洗一遍(如果血清中的蛋白对实 验没有干扰,也可以不洗);
    (2) 尽可能地弃去PBS(多余的液体将降低裂解液的浓度);
    (3) 按照1×106细胞需要50~100 µL的比例加RIPA裂解液,比如6孔板每孔细胞大约需加150~250 μL裂解液。用移液器吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细1~2 s后,细胞就会被裂解;
    (4) 将所有液体转入新的离心管中;

               ◈  对于悬浮细胞
    (1) 将细胞转移至离心管中,离心收集细胞,弃去培养基;
    (2) 1×PBS(货号PS110,或生理盐水、无血清培养液)洗一遍(如果血清中的蛋白对实验没有干扰,也可以不洗);
    (3) 尽可能的弃去PBS(多余的液体将降低裂解液的浓度);
    (4) 按照1×106细胞需要50~100 µL的比例加RIPA裂解液,比6孔板每孔细胞大约需加150~250 μL裂解液。用移液器吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必须分装5×105~1×106个细胞/管,然后再裂解;

               ◈  对于组织样品
    (1) 把组织剪切成细小的碎片;
    (2) 按照20 mg组织样本150~250 μL裂解液的比例加入裂解液;
                    go注意:如果样本裂解不充分,可以适当提高裂解液的用量;若需要高浓度的蛋白样品,也可适当降低裂解液的用量
    (3) 用玻璃匀浆器匀浆,直至样本充分裂解;
                    go注意:若组织样本非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液,通过强烈涡旋振荡使其裂解充分。
           3. 充分裂解后,10,000~14,000×g3~5 min,小心将上清液(蛋白样品)移入新的离心管中,即可进行后续PAGE凝胶电泳Western Blot和免疫沉淀等操作。得到的蛋白样品可分装并长期保存于-80℃。

    注意事项
    good1. 4℃保存时,裂解液中SDS易析出,使用前置于37使其完全溶解,待恢复到室温即可使用;
    good2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行;
    good3RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,此为正常现象,该物为基因DNA等形成的复合物。不检测和基因DNA紧密结合的蛋白,可以直接离心取上清用于后续实验;需要检测此类蛋白,则可以通过超声处理打散该透明胶状物,随后离心取上清即可用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例NF-kappaB、p53等,通常不必进行超声处理就可完成检测;
    good4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;
    good5. 本产品仅限科研使用。

    产品选择参考
    PC102 RIPA 裂解液(中强度)













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