Tuner(DE3)感受态细胞

 

Tuner(DE3)感受态细胞

Tuner(DE3)Chemically Competent Cell
产品编码：                        保存条件： -80℃  
产品规格:

Tuner（DE3）	20×100μl
pUC19（control vector）	10pg/μl            10μl

     

Tuner(DE3)感受态细胞基因型:

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm lacY1 (DE3)
 

Tuner(DE3)感受态细胞简要说明:

 Tuner（DE3）菌株是BL21菌株的 lacZY基因（半乳糖苷透性酶基因）突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。
此菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于Tuner的染色体上，所以称为Tuner（DE3） ，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
 Tuner（DE3）感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达10⁷cfu/μg。

 

Tuner(DE3)感受态细胞操作说明：

1.  取100μl冰上融化的Tuner（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
 

3.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

 

Tuner(DE3)感受态细胞注意事项:

1.   感受态细胞最好在冰上融化。
2.  混入质粒时应轻柔操作。
3.  转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.  诱导时，IPTG浓度可选（0.1-40mM均可）。
5.  为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

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