BL21(AI)感受态细胞

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    • 保存条件

      零下80度

    • 保质期

      1年

    • 英文名

      Mach1-T1Chemically Competent Cell

    • 库存

      1000只

    • 供应商

      南京赛泓瑞

    • 规格

      20*100ul

    BL21(AI)感受态细胞

    BL21(AI) 感受态细胞基因型:

    F- omphsdSB(rB-mB-gal dcm araB::T7RNAP-tetA

    BL21(AI) 感受态细胞简要说明:

     High5TM系列BL21(AI) 感受态细胞是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)BL21(AI) 来源于BL21菌株,为膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。
    该酶的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。
    使用L-阿拉伯糖诱导araBAD启动子下游的蛋白表达。使用葡萄糖可以抑制araBAD启动子下游的蛋白表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株体内的T7 RNA聚合酶水平能够进行有效调节,BL21(AI) 感受态细胞能够有效表达对其他BL21细胞有毒或生长抑制的蛋白。从BL21(AI) 菌株中获得目的重组蛋白产量,和其他BL21菌株产量相当。 High5TM系列BL21(AI) 感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg

    BL21(AI) 感受态细胞操作说明:

    1.  100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
    2. 42℃水浴热激90秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
    1.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YTLB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

    4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含50 µg/ml四环素及所选质粒筛选抗生素的2YT LB培养基上。
    1.  将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
    注意:
    1. Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中,而pCP20转化到其他菌株中都很正常,但是菌体原因未知。
    2. 即使不加葡萄糖,BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低,加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。
     

    BL21(AI) 感受态细胞注意事项

    1.   感受态细胞最好在冰上融化。
    2.  混入质粒时应轻柔操作。
    3.  转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
    4.  诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
    5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
     

    建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下:
    1.  使用T7启动子载体(高拷贝或者低拷贝都可以)进行蛋白表达。
    2.  使用其他BL21进行蛋白表达时,观察到明显的细菌生长的抑制作用。
    3. 表达一个已知的毒性蛋白。
     

     

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    BL21(AI)感受态细胞

      上海淳麦生物科技有限公司专注于感受态细胞、质粒、载体、农杆菌、酵母等生命科学领域的产品研发和技术服务支持。 
    上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发方面,实力雄厚,拥有了克隆、表达、酵母和农杆菌4大类,共计百余种感受态细胞。在电击感受态方面,拥有了大肠杆菌和农杆菌电击感受态种类,极大提高了客户在转基因以及文库构建方面的成功率。 



    BL21(AI)感受态细胞

     

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