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        各种感受态细胞的区别 用途 特征

        互联网

        11032

        M110或 SCS110


        大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.


        部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。


        大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。


        而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:


        (1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;


        (2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。


        E.coli JM110


        要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110


        如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.

        各种感受态细胞的区别 用途 特征


        Xl1-Blue菌株


        基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。


        特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。


        用途:分子克隆和质粒提取。


        BL21(DE3)菌株


        基因型:F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。


        特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。


        用途:蛋白质表达。


        BL21(DE3)ply菌株


        基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。


        特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。


        用途:蛋白质表达


        DH5α菌株


        基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ–


        特点:一种常用于质粒克隆的菌株。 其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。


        用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。


        JM109菌株


        基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。


        特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。


        用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

        (责任编辑:大汉昆仑王)

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