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- 百奥莱博
- BTN90407C-VFE
- 北京
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
364
- 英文名：
Lambda DNA
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输、-20℃
- 规格：
5μg
特别提示：包括cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
英文名称：Lambda DNA
产品货号：BTN90407C
产品规格：5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM
储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。
纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。
除了cl857 Sam7 λDNA(非甲基化),，我公司还供应以下相关产品：
名称：DNA去磷酸化试剂盒
货号：BTN130828
规格：20次
分子克隆时，载体的自连极大降低了连接效率，而对载体DNA 两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前，也需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就是针对这一目的而开发。
产品特点：
1.基于细菌碱性磷酸酶，反应在较高温度进行，效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团，丧失连接能力。
3. 模板可以是单链，也可以是双链，既可以是DNA，也可以是RNA。
4.处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 10×去磷酸缓冲液 | 100μl |
| 细菌碱性磷酸酶(0.5U/μL) | 50μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为6个月。
使用方法：
注意：dNTP和ATP 也是碱性磷酸酶的底物，所以如果核酸溶液中有dNTP和ATP，一定要先将其去除。否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶，降低DNA 去磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(50μL)：
| 成分 | 用量 |
| DNA片段 | 不超过10pmol |
| 10×去磷酸缓冲液 | 5μl |
| 细菌碱性磷酸酶 | 2.5μl |
| 超纯水到 | 50μl |
2、65℃反应30分钟。如果是RNA样品，建议在37℃反应30分钟。
3、酚*仿抽提去除酶活性，乙醇沉淀DNA 待用(见附)。
附：酚/*仿抽提DNA、乙醇沉淀浓缩DNA(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)：
1、在50μl DNA溶液中加入50μl超纯水增加体积，以免纯化过程中DNA 丢失。如果有必须，可以加入和4μL 核酸助沉剂提高回收效率。
2、加入100μL 酚/*仿/异戊*25：24：1 混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
3、重复上步操作一次。
4、加0.1倍体积(即10μL)的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
5、再加入2.5倍体积(即250μL)的无水乙醇。
6、混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
7、加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
8、短暂离心5秒，吸弃残留液体(约30-50μL)。
9、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。
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文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口(1)。 -------------------------------------------------------------------------------- 来源： 源于E.coli C600 pcl857 pPLc28 lig8 (2)。 应用： 限制性酶切片段的克隆 (3)。 将linker或adapters 连接到DNA片段的平滑末端。 反应缓冲
个外显子区[7]。健康人基因组中，CpG岛中的CpG位点通常是处于非甲基化状态，而在CpG岛外的CpG位点则通常是甲基化的。这种甲基化的形式在细胞分裂的过程中能够稳定的保留[8]。当肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，而CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，以致于染色体螺旋程度增加及抑癌基因表达的丢失[9]。 1.2 DNA甲基化的生物学作用 1.2.1 DNA甲基化与遗传印记、胚胎发育 DNA甲基化在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育过程中起着极其重要的作用。研究表明
2. 5mC免疫沉淀法（MeCIP） 这种方法是基于能够与5mC发生特异性反应得到单克隆抗体，通过抗体与5mC结合，将甲基化的DNA片段沉淀下来。再通过测量沉淀DNA估计甲基化程度。 3. M．SssI甲基转移酶 M．SssI可以将同位素标记的甲基从S―腺苷甲硫氨酸（SAM）转移到非甲基化的CpG序列上形成5mC，通过测量转移后同位素能量估计总体甲基化水平。 4. 氯乙醛法 DNA经重亚硫酸盐处理，使未甲基化的胞嘧啶全部转变
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