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- 2025年07月08日
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- 文献和实验
- 技术资料
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555
- 英文名：
N-BFP plasmid（with CMV promoter）
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
特别提示：包括N端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：N端BFP标签融合蛋白质粒(蓝色荧光蛋白)
英文名称：N-BFP plasmid（with CMV promoter）
产品规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含BFP(Blue Fluorescent Protein, 蓝色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个BFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有BFP标签的融合蛋白。利用BFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用BFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。BFP与GFP高度相似，可尝试用GFP抗体检测BFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
本质粒质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| CMV promoter | 1-602 |
| T3 promoter and T3 primer binding site | 620-639 |
| BFP | 677-1393 |
| Multiple cloning site | 1394-1483 |
| T7 promoter and T7 primer binding site | 1503-1524 |
| SV40 polyA signal | 1536-1919 |
| f1 origin of ss-DNA replication | 2057-2363 |
| bla promoter | 2388-2512 |
| SV40 promoter | 2532-2870 |
| Neomycin/kanamycin resistance ORF | 205-3696 |
| HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal | 3697-4155 |
| pUC origin | 4284-4951 |
本质粒的图谱如下：
使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
储存条件：-20℃。
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文献和实验Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
前言: NusA融合蛋白表达系统于9年前（1999年）由Davis发明，并在2000年由Novagen首先进行商业化设计和开发，特别推荐用于以NusA作为N端标签时提高在大肠杆菌中难溶的重组表达蛋白的可溶性。NusA融合蛋白表达系统面市至今，已经通过一些高通量表达筛选的评估确认其在可溶性改善方面的有效性。关于NusA融合表达蛋白去除或不去除NusA标签，目的蛋白仍然具有活性的报道也有很多。正是由于NusA标签系统的这种特性，使其成为目前在大肠杆菌表达体系中使用最为广泛的三个融合标签
绿色荧光蛋白的表达、检测及应用 2013-11-27 12:42:10 来源： 评论：0 我要评论
突变的方式,把第65位丝氨酸换成苏氨酸或胱氨酸,荧光强度提高了4～6倍。后来的研究中用到的gfp突变体都是在此基础上通过改变若干碱基而得到的。 gfp作为一种新型的非酶性报告基因,能与多种不同蛋白质的N端或C端融合表达而不影响各自的特征,即融合蛋白质在细胞内仍能行使正常功能,而且融合蛋白保持与GFP 相似的荧光特性,所以应用范围很广。如，将目的基因与gfp融合,导入 生物 体内进行表达,然后观察融合蛋白在细胞内的位置。检测简便,不需要任何外源底物或辅助因子,是一种直观性很强
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