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金黄色葡萄球菌热稳定定核酸酶(Dnase,192bp)常规PCR检测试剂盒
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上海钰博生物科技有限公司
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50次/盒
金黄色葡萄球菌热稳定定核酸酶(Dnase,192bp)常规PCR检测试剂盒具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。 2. 两管式 RT-PCR,一次 RT 反应产物可以作为多次 PCR 的模板。本试剂盒提供 10 次的 RT 反应试剂和 50 次的 PCR 试剂。 3. 引物经过优化,特异性高,引物是根据基因的保守区域设计,适用于所有强、中、弱新城疫毒株,产物长度为 421 bp。 4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 金黄色葡萄球菌热稳定定核酸酶(Dnase,192bp)常规PCR检测试剂盒特点优势: 1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过GenBank及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。 2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。 3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。 4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。 5. 优势1:序列资源丰富,除GenBank公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。 6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。 金黄色葡萄球菌热稳定定核酸酶(Dnase,192bp)常规PCR检测试剂盒性能指标: 1. 试剂盒检测特异性为100% 2. 检测试剂盒重现性为100% 3. 灵敏度可达到103/ml 4. 有效期为6个月 规格及成分
自备试剂:样品 RNA。 金黄色葡萄球菌热稳定定核酸酶(Dnase,192bp)常规PCR检测试剂盒使用方法: 一、样品 RNA 的制备 1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 2、或柱式病毒 RNAout。 二:RT(逆转录)反应合成 cDNA 1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系):
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI), 反应终体积为 20μL。 4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。 5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。 三、PCR(60 μL 体系) 1、在 PCR 管中加入下列成分:
1、取 10-20μL PCR 产物直接在 PAGE 或琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为421 bp。 关联产品 绿如蓝核酸染料 |
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RNA 模板 | 0.01pg-500 ng (如果丌知道浓度则用 1-10 μL) |
ND 专一性引物二(反向引物) | 2 μL |
RNase-free 水 | 补水到 12 μL |
成 份 | 样品 | ND 阳性对照 | 阴性对照 |
PCR MagicMix 3.0 | 30 μL | 30 μL | 30 μL |
cDNA 样品(上步的 RT 反应液) | 1-5 uL | 无 | 无 |
ND 阳性对照 | 无 | 2 μL | 无 |
ND 专一性引物一(正向引物) | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
ND 专一性引物二(反向引物) | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
补水到 | 60 uL |
过程 | 温度 | 时间 | 其他 |
预变性 | 95℃ | 5 min | |
PCR 反应 (40个循环) |
95℃ | 30 s | |
50℃ | 30 s | ||
72℃ | 40 s | ||
最后延伸 | 72℃ | 5 min |
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