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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负80度
- 保质期：
3年
- 英文名：
pCS2-nCas9n鱼类编辑质粒
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验诺奖得主 Science 发文：基因编辑诞生 10 年，未来将如何改变世界？
。 特定碱基位点的编辑修改 点突变是人类致病性遗传变异的最大类别，特定于位点的编辑修改拓宽了研究基因点突变的能力，并且可以通过纠正点突变来治疗遗传性疾病。此外，碱基编辑可以在有丝分裂和无丝分裂细胞中引入修饰。 CRISPR 碱基编辑器通常由 Cas9 切口酶（nCas9）和催化核碱基脱氨反应的酶融合组成。sgRNA 将 nCas9-脱氨酶融合引导至基因组靶标，形成三元复合物，将 ssDNA 区域暴露于脱氨酶以进行化学修饰，由此产生的碱基错配随后通过细胞修复机制解决。在过去的几年中，DNA
到 Cas9(D10A) 的 N 末端，并将核定位信号 (NLS) 肽添加到 Cas9(D10A) 的 C 末端，构建了 APOBEC1-XTEN-Cas9(D10A) 植物基因组单碱基编辑系统。利用该系统对水稻 NRT1.1B 和 SLR1 进行编辑，结果表明该系统能在靶位点产生预期的 C→T(G→A) 碱基替换，NRT1.1B 和 SLR1 在靶位点产生预期突变的效率分别为 2.7% 和 13.3%。夏兰琴和赵云德合作团队也利用 APOBEC1、Cas9 变体 (nCas9-D10A) 和 UGI
p53 在某些体系中能提高效率，但会引入基因组稳定性风险，需谨慎权衡。 3. 不依赖 HDR 的替代路径 如果 HDR 实在做不出来，可以考虑： HITI（同源非依赖靶向整合）：利用 NHEJ 途径实现定点插入，在非分裂细胞中也有活性，适合体内应用；代价是插入方向可能双向、接头处可能有 indel。 Prime Editing：nCas9 融合逆转录酶 + pegRNA，不需要 DSB 也不需要外源 dsDNA 供体，适合小片段精确编辑（几十 bp 以内），效率因靶点和细胞而异。 碱基编辑
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