pCS2-nCas9n-nanos 3’UTR鱼类编辑质粒

轻松学会寻找 crisprcas9 目的基因 CDS 序列

最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对

Nature 子刊：高彩霞团队开发可预测的精细下调目标基因蛋白表达的新方法

的技术手段。 上游开放阅读框（uORF）的长度及 uORF 与 pORF 之间的距离等多种因素都会影响 uORF 对 pORF 翻译的抑制能力。因此，研究团队猜想可通过以下两种策略抑制目标基因的翻译：第一种是在目标基因的 5' 非翻译区（5'UTR）从头产生新的 uORF；第二种是原位突变内源 uORF 的终止密码子以延伸其表达框长度。原生质体瞬时系统的结果表明这两种策略可以有效地将 pORF 的翻译抑制到不同的水平，且对其 mRNA 的表达量几乎没有影响。此后，研究团队利用碱基编辑和引导编辑系统

非编码RNA研究及实验

非编码RNA（Non-coding RNA）是指不编码蛋白质的RNA，包括miRNA、lncRNA、circRNA、piRNA等。非编码RNA发挥功能的方式很多，可以与蛋白、DNA和RNA相互作用，参与多种细胞活动，主要包括基因的激活和沉默，RNA的剪接、修饰和编辑，蛋白质的翻译等。 1. miRNA：miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNA也可以调节同一个基因。 图