Alkaline Phosphatase（碱性磷酸酶）

Alkaline Phosphatase（碱性磷酸酶）

描述

Invitrogen™ Anza™ 碱性磷酸酶适用于去除在 Anza™ 限制性内切酶酶切后保留的 3' 和 5' 磷酸基，如在插入片段连接之前的载体去磷酸化以及末端标记之前的5′磷酸去除。由于 DNA 连接需要 5′ 磷酸基，使用 Anza 碱性磷酸酶处理载体可防止自身连接和重新环化，导致克隆时载体背景减少。

Anza 碱性磷酸酶的特点：

•经验证，可与所有 Anza 限制性内切酶配合使用
• 在 37°C 下、15 分钟内去磷酸化
• 在80°C 下 5分钟后进行热灭活
• 在 Anza 缓冲液中具有完全活性
• 对所有类型 DNA 末端（平末端以及5'- 和 3'-突出端）进行去磷酸化

灵活方案
当同时进行酶切和去磷酸化时，一些限制性内切酶会禁止或减少去磷酸化过程。因此，根据所用的限制性内切酶，可通过以下三种方式之一使用 Anza 碱性磷酸酶：

•一步方案：在 Anza 缓冲液中同时进行限制性内切酶酶切和去磷酸化
• 热灭活两步方案：首先进行酶切，然后进行热灭活（80oC 下 20 分钟），然后进行去磷酸化
•柱纯化两步方案：首先进行酶切，然后进行柱纯化，然后进行去磷酸化

无需进行酶去除
无需在 80°C 下 5 分钟后对 Anza 碱性磷酸酶进行完全灭活，因此在随后的连接步骤之前无需通过苯酚/氯仿提取或柱纯化进行酶去除。如果使用一步法方案，则在 80oC 下加热反应混合物 20 分钟，对限制性内切酶以及碱性磷酸酶进行灭活。对碱性磷酸酶进行热灭活可防止残留磷酸酶使添加至反应混合物中进行连接的 DNA 片段去磷酸化。

Anza™ 碱性磷酸酶是 Anza™ 限制性内切酶克隆系统的一部分，统一了传统的克隆方法。其他 Anza DNA 修饰酶包括Anza T4 DNA 连接酶预混液、Anza T4 PNK 试剂盒、Anza DNA 平末端试剂盒以及Anza DNA 末端修复试剂盒。

有关 Anza 系统的更多信息，请访问 www.thermofisher.cn/anza。